SNT 2206.4-2009化妆品微生物检验方法 第4部分：链球菌.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2206.4—2009化妆品微生物检验方法第4部分：链球菌Determination of microbiological in cosmetics-Part 4 : Streptococcus spp.2009-09-01实施2009-02-20 发布中华人民共和国发布套国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2206.4—2009前言SN/T2206《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：-第1部分：沙门氏菌；第2部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌/;第3部分：肺炎克雷伯氏菌；第4部分：链球菌；第5部分：肠球菌。本部分为SN/T2206的第4部分。本部分的附录 A是规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理标准化委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国新疆出人境检验检疫局、中华人民共和国广州出人境检验检疫局食品检测中心负责起草。本部分的起草人：黄玲、蒋刚强、许龙岩、刘小兰、窦辉。本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2206. 4—2009化妆品微生物检验方法第 4部分：链球菌范围SN/T2206的本部分规定了化妆品中链球菌的检验方法。本部分适用于化妆品中链球菌的检验。2设备和材料2.1恒温培养箱：36℃士1℃。2.2 高压蒸气灭菌锅。2.3 冰箱:0℃～4℃。2.4显微镜：10×～100×。2.55天平：最大称量达2000g，精确至0.1g。2.6灭菌吸管：1 mL(具0.01mL刻度）、5mL(具0.1mL刻度）、10mL(具0.1mL刻度）。2.73灭菌试管:16 mmX160 mm、18 mmX180 mm。2.8灭菌培养Ⅲ：直径 90 mm。2.93灭菌三角瓶：内含玻璃珠。2.10 pH计或 pH试纸。2.11 酒精灯。2.12灭菌剪子、镊子等。2.13水浴箱。2.14灭菌研钵及研棒。2.15均质器。3培养基和试剂3.1SCDLP液体培养基：见附录 A 中第 A.1章。3.2脑心浸出液培养基:见附录 A中第 A.2 章。3.3血琼脂:见附录 A中第 A.3章。3.4无菌液体石蜡。3.5无菌吐温-80。检验程序4检验程序见图 1。 SN/T 2206.4--200910g（mL）检样制成1:10稀释样品（10mL）+90mLSCDLP24 h36℃±1℃血琼脂、脑心浸液琼脂24 h36℃±1℃+万古霉素实验涂片染色触酶实验“报告图1化妆品中链球菌的检验程序5 操作步骤5.1增菌培养：取1：10稀释样品10mL加人到90mLSCDLP液体培养基，置36℃±1℃、培养24h。5.2分离培养：从培养液中挑取培养物，划线接种到血琼脂脑心浸液琼脂平板上，置36℃±1℃培养24h。如有菌落生长，在血琼脂上链球菌菌落特征：呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，菌落直径约0.5mm～2mm。在脑心浸液琼脂平板上，其菌落呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑,有乳光,菌落直径约 0.5 mm～2 mm。5.3染色镜检：挑取若干可疑的菌落，革兰氏染色，镜检垦现链状或双排列的革兰氏阳性球菌。5.4触酶实验：取一块洁净的白绝滤纸片放在灰菌平Ⅲ内，用接种环挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后加一滴3%过氧化氢溶液，30s乏内，出现气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。5.5万古霉素实验：挑取可疑的菌落接种于含有万古霉素（0.克iug/L～4.0μg/L)的脑心浸液琼脂培养基中，置36℃士1℃培养18h→24h。观察细菌生长情况，链球菌均不能生长。6结果报告被检样品经增菌分离培养后，有可疑菌落生长，经证实为革兰氏阳性链状或双排列的球菌，触酶实验反应为阴性、对万古霉素敏感的细菌即可报告被检样品中检出链球菌。 SN/T 2206. 4—2009附录A（规范性附录）试剂和培养基A. 1SCDLP 液体培养基A.1.1　成分酪蛋白陈17.0g大豆蛋白陈　3.0g氯化钠　5.0g磷酸氢二钾 2.5 g葡萄糖 2.5g卵磷脂1.0g吐温-807.0 g蒸馏水　1000 mLA.1.2＇制法：将上述成分混合后,加热溶解,调pH为 7.2～7.4分装于适合的容器中,121℃高压灭菌20min。注意振荡，使沉淀于底层的吐温-80充分混合，冷却至25℃左右使用。A.2 脑心浸出液培养基A.2.1成分蛋白陈　10g牛脑浸粉　12.5g葡萄糖 2.0g牛心浸粉5.0g氯化钠　5.0g磷酸氢二钠2.5g蒸馏水²1000 mLA.2.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调pH为7.2～7.4分装，121℃高压灭菌20min冷却至25℃左右使用。A.3 血琼脂A.3.1成分100 mL豆粉琼脂(pH7.4～7.6)脱纤维羊血(或兔血)5 mL~10 mLA.3.2制法：加热溶化琼脂,冷到50℃，以灭菌手续加人脱纤维羊