NY_T 1671-2008乳及乳制品中共轭亚油酸（CLA）含量测定 气相色谱法.pdf

ICS 67.100.10X 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1671-2008乳及乳制品中共轭亚油酸(CLA）气相色谱法含量测定Determination of conjugated linoleic acid (CLA) content in milk andmilk productsGas chromatography2008-10-01实施2008-08-28 发布中华人民共和国农业部发布 NY/T 1671-2008前言本标准中附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）。本标准主要起草人：卜登攀、魏宏阳、王加启、周凌云、许晓敏、刘仕军。 NY/T及乳制品中共轭亚油酸（CLA)含量测定气相色谱法1范围本标准规定了乳及乳制品中共轭亚油酸(CLA)含量的气相色谱测定方法。本标准适用于乳及乳制品中CLA含量的测定。本方法中，顺式9，反式11共轭亚油酸（cis9，trans11CLA）和反式10，顺式12共轭亚油酸（trans10，cis12CLA)的最低检出量分别为9.0ng和13.8ng。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1conjugated linoleic acid,CLA共轭亚油酸具有共轭双键的亚油酸统称为共轭亚油酸（conjugated linoleic acid)。本标准特指顺式 9，反式11共轭亚油酸(cis9，trans11CLA)和反式10,顺式12共轭亚油酸(trans10,cis12CLA)两种异构体。4原理乳及乳制品经有机溶剂提取粗脂肪后，经碱皂化和酸酯化处理生成共轭亚油酸甲酯，再经正已烷萃取，气相色谱柱分离，用氢火焰离子化检测器测定，用外标法定量。5试剂除非另有规定,在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。5.1无水硫酸钠[NazSO4]。5.2正已烷[CH(CH2)4CH3]:色谱纯。5.3 异丙醇[(CH3)2CHOH]。5.4氢氧化钠甲醇溶液：称2.0g氢氧化钠溶于100mL无水甲醇中，混合均匀，其浓度为20g/L。现用现配。5.5100mL/L盐酸甲醇溶液：取10mL氯乙酰[CH3COCI]缓慢注入盛有100mL无水甲醇的250mL三角瓶中，混合均匀，其体积分数为100mL/L。现用现配。警告：氯乙酰注入甲醇时，应在通风橱中进行，以防外溅。5.6硫酸钠溶液：称取6.67g无水硫酸钠（5.1)溶于100mL水中，其浓度为66.7g/L。5.7正已烷异丙醇混合液（3十2)：将3体积正已烷（5.2)和2体积异丙醇(5.3)混合均匀。1 NY/T 1671—20085.8共轭亚油酸(CLA)标准溶液：分别称取顺式 9,反式11共轭亚油酸(cis9,trans11CLA)甲酯和反式10，顺式12共轭亚油酸（trans10，cis12CI.A）甲酯标准品各10.0mg，置于100mL棕色容量瓶中，正已烷(5.2)溶解并定容至刻度，混匀。顺式9，反式11共轭亚油酸(cis9,trans11CLA)和反式10，顺式12共轭亚油酸（trans10，cis12CLA)的浓度均为95.2μg/mL。6仪器常用设备和以下仪器。6.1冷冻离心机：T作温度可在0℃～8℃之间调节，离心力应大于2500g。6.2气相色谱仪：带FID检测器。6.3色谱柱：100%聚甲基硅氧烷涂层毛细管柱，长100m，内径0.32mm，膜厚0.25μm。6.4分析天平：感量0.0001g。6.5带盖离心管：10mL。6.6恒温水浴锅：40℃～90℃，精度士0.5℃。6.7带盖耐高温试管。6.8涡旋振荡器。7分析步骤7.1试样称取：做两份试料的平行测定。称取含粗脂肪50mg～100mg的均匀试样，精确到0.1mg，置于带盖离心管（6.5)中。7.2粗脂肪的提取：在试样(7.1)中加入正已烷异丙醇混合液（5.7）4mL，涡旋振荡2min。加人2mL硫酸钠溶液（5.6），涡旋振荡2min后，于4℃、2500g离心10min。7.3皂化与酯化：将上层正已烷相移至带盖耐高温试管（6.7)中，加人2mL氢氧化钠甲醇溶液（5.4)，拧紧试管盖，摇匀，于50℃水浴皂化15min。冷却至室温后，加入2mL盐酸甲醇溶液（5.5），于