SN_T 2798-2011进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法 高效液相色谱法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2798-2011进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法高效液相色谱法Determination of phenol residues in royal jelly for import and export--High performance liquid chromatography method2011-07-01实施2011-02-25 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局X SN/T 2798—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局。本标准主要起草人：黄超群、谢文、陈笑梅、刘海山、史颖珠。 SN/T 2798—2011进出口蜂王浆中苯酚残留量的测定方法高效液相色谱法1范围本标准规定了蜂王浆中苯酚残留量液相色谱测定方法。本标准适用于蜂王浆中苯酚残留量的测定，2方法提要样品用甲醇沉淀蛋白质后，上层清液经HIB固相萃取柱净化。用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。3.1甲醇：液相色谱纯。3.2乙腈：液相色谱纯。3.3甲醇-水(15+85，体积比）3.4甲醇-水(1十1,体积比）。3.5苯酚标准物质(Phenol/CAS编号108-95-2,C。H。O)：纯度大于等于99%。3.6苯酚标准储备液：准确称取适量的苯酚标准物质（3.5），用甲醇（3.1)配制成浓度为0.10mg/mL的标准储备液，一18℃保存。有效期为6/个月。3.7苯酚标准工作液：根据需要用甲醇十水(3.4)溶液稀释成适当浓度的标准工作溶液，0℃～4℃保存。有效期为3个月。3.8HLB固相萃取柱（或相当者）:500 mg,6 mL。使用前用5mL甲醇10mL水预洗并保持柱体湿润。仪器和设备44.1高效液相色谱仪，配有荧光检测器。4.2固相萃取仪。4.3高速离心机：9000g。4.4振荡器。5试样制备和保存取500g代表性蜂王浆样品，在室温下解冻，等样品全部融化后搅匀，将试样均分成两份，分别装入样品瓶中,密封,并标明标记。一份作为试验样，另一份在一18℃保存。在制样的操作过程中，应防止样品污染或发生残留物含量的变化。1 SN/T 2798--20116测定步骤6.1提取称取试样 4 g(精确至 0.01 g)，置于 50 mL离心管中,加人 10 mL水，振荡 2 min,再加人甲醇至20.0 mL,混匀，离心(9 000g)5 min。移取上层清液 10.0 mL至 50 mL离心管中，加水至 30 mL,待净化。6.2　净化将上述提取液过预先淋洗好的HLB固相萃取柱，再用5mL15%甲醇-水（15十85，体积比）溶液淋洗，在真空负压下，减压抽干,弃去全部淋出液。用 4 mL甲醇以 1 mL/min 的流速洗脱，收集全部洗脱液,摇匀后加人 1.0 mL水,混匀，氮吹至 1 mL～2 mL,用甲醇定容至2.0mL,0.45 μm滤膜过滤，供液相色谱测定。6.3　测定6.3.1、液相色谱条件6.3. 1. 11色谱柱：Ci:柱,5 μm,250X4.6 mm(内径)或相当者。流动相：乙腈十水（30十70，体积比）。 流速:1.0 mL/min。　检测波长：激发波长270nm，发射波长295nm。进样量:100 μL。6.3.2色谱测定根据试样溶液中苯酚含量情况，选定峰面积相近的苯酚标准工作溶液。标准工作溶液和试样溶液中苯酚的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和试样溶液等体积参插进样进行测定。在上述色谱条件下,苯酚的参考保留时间为8.32min。苯酚标准物质的色谱图参见图 A.1。6.4 空白试验除不加试样外，均按上述步骤进行。7 结果计算和表述蜂王浆中苯酚残留量按式(1)计算：A.cs.VX:(1)A..m式中:X--试样中苯酚的残留含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A --试样溶液中苯酚的峰面积；-标准工作液中苯酚的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；Cs -V样液最终定容体积,单位为毫升(mL);As--标准工作液中苯酚的峰面积;m最终样液所代表的试样量，单位为克（g）。2 SN/T 2798—2011测定低限和回收率88.1测定低限本方法对蜂王浆中苯酚的测定低限为0.050 mg/kg。8.2回收率采用本法时，蜂王浆中苯酚添加浓度及平均回收率的试验数据如下：添加量为0.050mg/kg时，回收率范围为75.0%～80.0%；-添加量为0.100mg/kg时，回收率范围为83.2%～90.0%；添加量为0.200 mg/kg时，回收率范围为88.4%～91.5%。3 SN/T 2798—2011附录 A（资