实验蛋白质的沉淀反应与颜色反应.pdfVIP

.* 实验 蛋白质的沉淀反应与颜色反应 一、实验目的 掌握鉴定蛋白质的原理和方法。熟悉蛋白质的沉淀反应，进一 步熟悉蛋白质的有关反应。感谢阅读 二、实验原理 蛋白质分子中某种或某些集团可与显色剂作用，产生颜色。不同 的蛋白质由于所含的氨基酸不完全相同，颜色反应亦不完全相同。颜 色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质也可产生同样的颜色 反应，因此不能根据颜色反应的结果来决定被测物是否为蛋白质。另 外，颜色反应也可作为一些常用蛋白质定量测定的依据。蛋白质是亲 水性胶体，在溶液中的稳定性与质点大小、电荷、水化作用有关，但 其稳定性是有条件的，相对的。如果条件发生了变化，破坏了蛋白质 的稳定性，蛋白质就会从溶液中沉淀出来。精品文档放心下载 三、实验仪器 1、吸管 2、滴管 3、试管 4 、电炉 5、pH 试纸 6、水浴精品文档放心下载 锅7、移液管 四、实验试剂 1、卵清蛋白液：鸡蛋清用蒸馏水稀释10-20 倍，3-4 层纱布过滤，谢谢阅读 滤液放在冰箱里冷藏备用。 2、0.5%苯酚：1g 苯酚加蒸馏水稀释至200ml 。谢谢阅读 .* 3、Millon’s 试剂：40g 汞溶于60ml 浓硝酸（水浴加温助溶）溶谢谢阅读 解后，冷却，加二倍体积的蒸馏水，混匀，取上清夜备用。此试剂可精品文档放心下 载 长期保存。 4 、尿素晶体 5、1%CuSO ：1g CuSO 晶体溶于蒸馏水，稀释至100ml 感谢阅读 4 4 6、10%NaOH：10g NaOH 溶于蒸馏水，稀释至100ml 感谢阅读 7、浓硝酸 8、0.1%茚三酮溶液：0.1g 茚三酮溶于95% 的乙醇并稀释至100ml.谢谢阅读 9、 冰醋酸 10、浓硫酸 11、饱和硫酸铵溶液：100ml 蒸馏水中加硫酸铵至饱和。精品文档放心下载 12、硫酸铵晶体：用研钵研成碎末。 13、95% 乙醇。 14、醋酸铅溶液：1g 醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100ml 谢谢阅读 15、氯化钠晶体 16、10%三氯乙酸溶液：10g 三氯乙酸溶于蒸馏水中并稀释至谢谢阅读 100ml 17、饱和苦味酸溶液：100ml 蒸馏水中加苦味酸至饱和。感谢阅读 18、1%醋酸溶液。 五、实验步骤 蛋白质的颜色反应 （一） 米伦（Millon’s）反应 .* 1、苯酚实验：取0.5%苯酚溶液1ml 于试管中，加Millon’s 试剂精品文档放心下载 0.5ml ，电炉小心加热观察颜色变化。 2、蛋白质实验：取2ml 蛋白液，加Millon’s 试剂0.5ml ，出现白感谢阅读 色的蛋白质沉淀，小心加热，观察现象。 （二） 双缩脲反应 1、取少量尿素晶体放在干燥的试管中，微火加热熔化，至重新感谢阅读 结晶时冷却。然后加10%NaOH 溶液1ml，摇匀，再加2-4 滴1% CuSO4 溶液，混匀，观察现象。精品文档放心下载 2、取蛋白液1ml，加10%NaOH 溶液1ml，摇匀，再加2-4 滴精品文档放心下载 1% CuSO4 溶液，混匀，观察现象。 （三） 黄色反应 取一支试管，加入1ml 蛋白液及浓硝酸5 滴。加热，冷却后注意谢谢阅读 颜色变化。然后再加入10%NaOH 溶液1ml，观察颜色有什么变化。谢谢阅读 （四） 茚三酮反应 取蛋白液1ml 于试管中，加4-8 滴茚三酮溶液，加热至沸，即有精品文档放心下 载 蓝紫色出现。 蛋白质的沉淀 （一）蛋白质的盐析作用