氧自由基与细胞间粘附分子-1在老年大鼠心肌缺血再灌注损伤时的变化.docxVIP

氧自由基与细胞间粘附分子-1在老年大鼠心肌缺血再灌注损伤时的变化 在旧时期，由于重新注入心肌缺血（i级）的损伤，死亡的压力比年轻时明显，其确切机制尚不清楚。在以往的研究中，明确发现氧自由基（o3）和细胞间粘附在-1（icam-1）中的氧自由基参与心肌疾病的预防和。本实验应用青、老年大鼠心肌IRI模型, 观察心肌缺血再灌注时ICAM-1蛋白质表达及其与超氧化物歧化酶 (SOD) 、丙二醛 (MDA) 、中性粒细胞浸润 (PMNs) 、心肌梗死面积的关系, 探讨老年大鼠心肌IRI的机制。 1 材料和方法 1.1 心肌缺血再灌注损伤模型 依据Wistar大鼠正常寿命范围, 将2月龄Wistar大鼠36只, 体重250～300g, 设为青年组 (YIR组) ;2年龄Wistar大鼠36只, 体重400～450克, 设为老年组 (OIR组) , 雌雄不拘, 两组均先缺血60分钟, 然后随机分设再灌注3、6、12、24小时共4个时相点;心肌缺血再灌注损伤模型参照方喜业方法加以改进, 以收紧结扎线后心电图Ⅰ或左前胸导联融合的ST-T抬高, 放松后抬高的ST-T下降1/2以上为造模成功。对照组只埋线不结扎。于各相应时相点活杀动物取心脏缺血区的心肌测定各时相点ICAM-1蛋白质表达、SOD、MDA、PMNs 4个指标。对照组只埋线不结扎, 选12小时时相点作为总体对照。另用青、老年大鼠各25只, 分组方式同上, 每组5只, 测定心肌梗死范围。 1.2 化学、化学、sod、mda测试 ICAM-1单克隆抗体 (美国RD公司) , SP免疫组织化学测试药盒 (福州迈新公司) , HTAB、O-dianisidine, TTC, (Sigma公司) , SOD、MDA测试盒 (南京建成生物工程研究所) ;其余试剂均为分析纯级。 1.3 检测方法 1.3.1 ic-1的蛋白质含量为 取待测心肌冰冻切片用SP免疫组织化学染色法测定, DAB显色;结果用CMIAS007计算机医学图像分析仪处理, 单位以面密度表示。 1.3.2 测定心肌中粒浸润 参照Bradley等建立的髓过氧化物酶 (MPO) 法测定心肌中性粒细胞浸润数量。 1.3.3 dap和sod测试 按常规制作心肌组织匀浆。心肌组织MDA用硫代巴比妥酸比色法测定, 心肌组织SOD活性测定用黄嘌呤过氧化物酶法。 1.3.4 测定脉搏面积 用TTC染色法测定, 以梗死心肌与左室重量的百分比表示梗死范围。 1.4 统计方法 数据资料以 (ˉxxˉ±s) 表示, 采用Origin统计软件中的单因素方差分析,t检验。 2 结果 2.1 青、老年组蛋白表达水平 青、老年组大鼠心肌IR时, ICAM-1蛋白表达均明显增高, 在缺血1小时时, 其表达已有增高, 再灌注后改变更加显著, 至再灌注12～24小时达高峰;青、老年组高峰期表达分别较对照组增高189.5倍和244.7倍,P均0.01;青年组于再灌注12小时后其蛋白表达基本维持在同一水平, 而老年组仍有持续缓慢增高的趋势。青、老年组各相应时相点ICAM-1蛋白含量间差别均有显著性意义 (均P0.05, 见表1、表6、表7) 。 2.2 青、老年组灌注前后灌注后变化 青、老年组大鼠心肌缺血1小时时, 其PMNs浸润数已有明显增高, 再灌注后改变更加显著, 至再灌注12小时后增加的速率有所减缓, 但至24小时仍未见下降;青、老年组各时相点较对照组明显增高, 均P0.05～0.01;老年组与青年组各相应时相点之间比较, 除I 1小时一个时相点外, 其余各时相点的PMNs浸润数间的差别均有显著性意义 (均P0.05, 见表2、表6、表7) 。 2.3 青、老年组各时相点比较 青、老年组大鼠于心肌缺血1小时MDA已明显增加, 再灌注后改变更加显著, 至再灌注6小时达峰值后逐渐下降;青、老年组各时相点较对照组明显增高 (P均0.05) ;老年组与青年组各相应时相点之间比较, 除I1小时时相点外, 其余各时相点的MDA含量间的差别均有显著性意义 (P均0.05, 见表3、表6、表7) 。 2.4 0.05 青、老年组大鼠于心肌缺血1小时时SOD即已明显降低, 至再灌注6小时达低谷, 以后逐渐回升 (P均0.05) ;老年组与青年组各相应时相点之间比较, 只有在IR 12小时时相点心肌SOD活性间的差别有显著性意义 (P0.01, 表4、表6、表7) 。 2.5 控制自己尔氏红色的下降的趋势 心肌缺血再灌注后, 老年组与青年组心肌梗死范围均呈逐步增高的趋势, 这种改变在再灌注12小时后趋缓。老年组与青年组各相应时相点之间比较, 心肌梗死范围间的差别均有显著性意义 (均P0.05, 见表5、表6、表7) 。 3 血清蛋白及血清其他指标变化 老年期机体对心肌缺血再灌注损伤的敏