hplc法测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量.docxVIP

hplc法测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量 镇菊抗压片是治疗高血压的常用药物，由中西药结合使用。它由野生菊花粉、羟色胺和芦丁组成。适用于各期各型高血压,原标准只对其进行了定性鉴别,未做定量测定,高效液相色谱法测定其中的含量也有报道,但分离效果都不太理想,本文建立了用HPLC法同时测定珍菊降压片中氢氯噻嗪和芦丁的含量,方法简便、准确。其他成分不干扰测定,可为其定量提供依据。 1 标准分析方法 SP-8810高效液相色谱仪;SPECTRA紫外检测器;SP4400色谱数据处理机;珍菊降压片(东盛科技股份有限公司制药一厂);氢氯噻嗪、芦丁,盐酸可乐定对照品(中国药品生物制品检定所);乙腈为色谱纯,其他试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 枸杞酸乙腈标准 色谱柱:Spherisorb C18(250mm×4.6mm 5μm),流动相:0.05mol·L-1枸橼酸-乙腈(80∶20)用三乙胺调节pH值至4.1±0.1,流速:1.0mL·min-1,检测波长:270nm,灵敏度:0.1AμFs,纸速:0.25cm·min-1;柱温:室温,进样量:10μL。 2.2 氢氯噻嗪和芦丁的分离度 分别称取氢氯噻嗪,芦丁对照品适量,用流动相溶解并稀释成25μg·mL-1和100μg·mL-1的混合液,按照上述色谱条件进样,氢氯噻嗪和芦丁的保留时间分别为6.3min,9.7min,以氢氯噻嗪计算理论塔板数为5300,以芦丁计算,理论塔板数为3500,两者分离度大于5。氢氯噻嗪与盐酸可乐定的分离度大于3,阴性样品对测定无干扰。 2.3 线性回归分析 精密称取氢氯噻嗪对照品50mg,芦丁对照品200mg,置同一100mL量瓶中。加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取1.0,2.0,3.0,4.0,5.0mL分别置于50mL量瓶中用流动稀释至刻度,按上述色谱条件分别进样,记录峰面积,以峰面积为纵坐标(y),相应浓度(x)为横坐标,进行线性回归,得回归方程为: 氢氯噻嗪Y=5657.1X-2058.8r=0.9994 芦丁Y=2178.4X-13110.9r=0.9993 结果表明氢氯噻嗪在10~50mg·mL-1,芦丁在40~200mg·mL-1范围内线性关系良好。 2.4 试验结果的测定 精密称取已知含量的样品(批号030405)1片量5份,各加入一定量的氢氯噻嗪和芦丁混和对照品溶液,照样品测定项下方法测定,计算,结果见表1,表2。 2.5 外标法计算峰面积 取本品20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于1片量),置200mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,滤过,取续滤液进样,按外标法以峰面积计算,结果见表3。 2.6 芦丁的rsd/ls 取对照品溶液重复进样5次,峰面积基本不变,氢氯噻嗪的RSD(n=5)为0.4%,芦丁的RSD(n=5)为0.7%;取同一样品溶液分别在0,4,8,24h进行测定,峰面积基本不变,氢氯噻嗪的RSD(n=4)为0.9%,芦丁的RSD(n=4)为1.2%。 2.7 盐酸ctd-l 因为处方中含有盐酸可乐定,为了确定其不影响其他成分的测定,称取盐酸可乐定原料30mg,置100mL瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,进样,色谱图见图2。说明盐酸可乐定及其杂质不影响其他二成分的测定。 3 讨论 3.1 检测波长的确定 取氢氯噻嗪和芦丁对照品,用流动相溶解,在μV-2100分光光度计,200nm~400nm处扫描,氢氯噻嗪的λmax为270nm、芦丁的λmax为256nm。为了提高其检测灵敏度,选取氢氯噻嗪的最大波长为其测定波长。芦丁在此也有较大的吸收。 3.2 提取方法的确定 取样品分别用水、流动相及甲醇提取,结果用流动相提取的样品杂质峰少,基线平稳。 3.3 ph值对氢氯噻嗪和芦丁出峰的影响 在一定范围内,当pH值降低时,氢氯噻嗪和芦丁的出峰均加快,当pH值升高时氢氯噻嗪和芦丁的出峰均减慢,综合考虑分离度。出峰时间及ODS柱的稳定性等诸多因素,认为pH值在4.1左右较为合适。