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PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 1 紫外—可见光谱实验报告 姓 名：张瑞芳 姓 名：张瑞芳 班 级：化院413班 学 号：2013E8003561147 培养单位：上海高等研究院 指导教师：李向军 实验日期：2013年12月4日 PAGE PAGE 2 PAGE PAGE 1 PAGE PAGE 1 实验目的 学会使用UV-2550型紫外-可见光分光光度计。 掌握紫外—可见分光光度计的定量分析方法。 学会利用紫外可见光谱技术进行有机化合物特征和定量分析的方法。 二、实验原理 基于物质对200-800nm光谱区辐射的吸收特性建立起来的分析测定方法称为紫外—可见吸收光谱法或紫外—可见分光光度法。紫外—可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外—可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即： 其中A是吸光度，I、I0分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，ε为摩尔吸光系数，b为样品厚度，c为浓度。 紫外吸收光谱是由于分子中的电子跃迁产生的。按分子轨道理论，在有机化合物分子中这种吸收光谱取决于分子中成键电子的种类、电子分布情况，根据其性质不同可分为3种电子：（1）形成单键的σ电子 ；（2）形成不饱和键的π电子 ；（3）氧、氮、硫、卤素等杂原子上的未成键的n电子 。 图1. 基团中的σ，π，n成键电子 当它们吸收一定能量ΔE后，将跃迁到较高的能级，占据反键轨道。分子内部结构与这种特定的跃迁是有着密切关系的，使得分子轨道分为成键σ轨道、反键σ*轨道、成键π轨道、反键 π* 轨道和n轨道，其能量由低到高的顺序为：σπnπ*σ*。 图2.分子轨道中的能量跃迁示意图 仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。 三、仪器与溶液准备 UV-2550型紫外—可见分光光度计 1cm石英比色皿一套 UVprobe电脑软件 配置好的10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL以及未知浓度的甲基紫溶液，甲基红溶液 仪器的基本构成： 紫外可见分光光度计的基本结构如下： 光源→单色器→吸收池→检测器→信息处理与显示系统 样品 样品 四、实验步骤 1、打开电源，开启紫外—可见分光光度计上的开关，打开电脑上的UVprobe软件，让其自检，约5min后，对仪器相关参数设置。设置波长范围为710-365nm，高速检测，间隔为0.5nm。 2、空白对比实验。取一定量的蒸馏水装进1cm石英比色皿至2/3，在Win-UV?主显示窗口下，单击所选图标“基线”以扫描蒸馏水的测定吸收曲线。 3、分别用取10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL的甲基紫溶液装进石英比色皿中放到紫外—可见分光光度计中，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据和吸光度 (每次测量完成后注意保存数据) 。得到其标准图谱。 4、同样的方法测定未知浓度的甲基紫溶液的最大吸收波长数据。并与标准图谱相对照。 5、用同样的方法以乙醇为空白对比溶剂测甲基红的最大吸收波长数据。 6、数据处理和分析。 7、结果与讨论。 五、实验数据处理 1．实验数据记录 将实验数据用excel作图可得到甲基紫和甲基红的紫外可见分光波谱图，分别如图3和图4. 15μg/mL10μg/mL未知浓度 15μg/mL 10μg/mL 未知浓度 图3.实验1标准溶液的紫外可见分光波谱图 图4，实验2的紫外可见分光波谱图 2.实验数据处理 (1)由实验1所得的可见分光波谱图可知，该溶液的最大吸收波长为580nm，查相关资料知，该溶液为甲基紫。实验2所得的最大吸收波长为410nm，查相关资料知，实验2的溶液为甲基红。 (2)将波长为580nm时不同浓度的甲基紫溶液的吸光度列出如表1。 表1，不同浓度的甲基紫溶液最大吸光度数据 所测溶液浓度（μg/mL） 最大吸收波长（nm） 最大吸光度 10 580 1.274 15 580 2.048 20 580 2.659 未知 580 0.732 将上述表格中的数据通过excel作图，得到如图3的图像和函数，函数为A=0.1337c，而所测未知溶液的最大吸收波长为580nm，断定其为甲基紫溶液，它的吸光度为0.732，带入函数或者查图，可知未知的甲基紫溶液的浓度为5μg/mL。 图5，甲基紫吸光度与浓度的关系曲线 六、分析与讨论 1、从实验结果中可得，所测的未知样品为甲基紫溶液，且其浓度为5μg/mL。 2、从甲基紫及甲基红的结构中可看出，在λmax处的吸收峰为共轭体系的吸收，