生理学实验报告_2.docVIP

蟾蜍坐骨神经干复合动作电位特性 药学1102班 邵柏豪 3110104208 组员：吴晨皓 朱园润 实验时间2013年5月7日 医学院教学楼 【实验目的】 应用微机生物信号采集处理系统记录蟾蜍坐骨神经干复合动作电位（compound action potention，CAP） ，观察刺激、神经损伤、药物对神经兴奋性、兴奋传导的影响并探讨其机制。 【实验原理】 动作电位：是指可兴奋细胞受到刺激时在 静息电位的基础上产生的可扩布的电位变化过程。动作电位由峰电位（迅速去极化上升支和迅速复极化下降支的总称）和后电位（缓慢的电位变化，包括负后电位和正后电位）组成。峰电位是动作电位的主要组成成分，因此通常意义的动作电位主要指峰电位。动作电位的幅度约为90~130mV，动作电位超过零电位水平约35mV，这一段称为 超射。神经纤维的动作电位一般历时约0.5~2.0ms，可沿膜传播，又称 神经冲动，即兴奋和神经冲动是动作电位意义相同。 动作电位产生过程中是由钠通道激活导致钠离子内流，因此钠通道的状态必定影响细胞对于新的刺激的反应性。当钠通道由激活状态进人失活状态后，无论给予其多么强大的刺激，均不能引起其再次开放，即引起新的动作电位，这就是绝对不应期。电压门控的钾通道只有一道门、两种功能状态。安静时，是关闭状态，门是关闭的；激活时是开放状态，此时门是开放的。并且，钠离子通道的开闭，受到细胞内外钾离子浓度差的调整。当细胞内钾离子浓度高于细胞外钾离子浓度，钠离子通道开启。若细胞内浓度小于等于细胞外浓度，则关闭，直接导致动作电位不能正常产生。 【实验材料】 实验动物 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 药品 任氏液、3 mol 氯化钾 器材 RM6240微机生物信号处理系统（成都仪器厂）、神经干标本盒。 【实验方法和步骤】 坐骨神经干制备 蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经标本置任氏液中备用 仪器连接和参数 神经干标本盒两对引导电极分别接微机生物信号处理系统1、2通道。 仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采样频率：100KHz，扫描速度：0.2ms/div。单刺激激方式，刺激幅度1.0V，刺激波宽0.1ms，延迟2ms，同步触发。 动作电位引导 神经干标本置于标本盒的电极上，神经与电极接触良好，调节刺激电压，记录动作电位。 观察 观察中枢端CAP 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干末梢端，观察中枢端CAP正、负向振幅(amplitude，A)和时程(duration，D)。 测定双相动作电位（biphasic action potential, BAP） 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定末梢端BAP正、负相振幅和时程。 测定阈值 用0.1V的电压刺激坐骨神经，同时观察电脑上显示的波形，逐渐增大电压，直到电脑上出现一条水平稳定的直线，记录此时的电压值，即为阈值。 测定最大刺激电压 用0.5V的电压刺激坐骨神经，同时观察电脑上显示的波形，同时观察左上角的Vm参数，同时逐渐增大刺激电压，观察Vm参数数值的变化。当Vm数值的变化到达一个最大值，或在一个较大值之间来回波动，此时的电压值就是该坐骨神经的最大刺激电压。 传导速度测定 用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定第1和第2对引导电极引导CAP起点的时间差Δt ，根据υ＝ S R1- R2- / Δt 计算出AP的传导速度。 测定单相动作电位（monophasic action potential，MAP） 用镊子夹伤对1对引导电极间的神经干，然后用1.0V电压，波宽0.1ms的单个方波激刺激神经干中枢端，测定末梢端MAP振幅和时程。 观察刺激强度（U）与动作电位振幅的关系 刺激波宽0.1ms，刺激电压从0.1V开始， 按步长0.05V增加，刺激电压每增加一次刺激神经干一次，并记录刺激电压和MAP振幅。 测定KCl处理前后MAP振幅 刺激电压1.0V，刺激波宽0.1ms，记录 3 mol/L KCl 处理前，处理后5min时MAP的振幅。 【实验数据记录和处理】 在处理实验数据时，剔除了明显存在误差，或者蟾蜍坐骨神经兴奋性明显不同于正常蟾蜍，所测得实验数据。（第3组和第4组） 表1 蟾蜍坐骨神经干的阈刺激、最大刺激和传导速度 sample Uth(V) Umax(V) V(m/s ) 1 0.26 1