高效液相色谱法—高效液相色谱仪（仪器分析课件）.pptxVIP

;;;HPLC;;2.高效液相色谱仪组成;二、仪器操作（一）开机前 的准备;1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的洗脱柱（注意方向）和定量环。 3、 配制样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂）;4.将选用的高效液相色谱色谱柱安装在流路中，拧紧柱的连接接头。 5.检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。;第二步、开 机;一）参数设定;二）更换流动相并排气泡 1： 将吸滤器放入装有准备好的 流动相的储液瓶中； 2 ：顺时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀； ; ;用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。 检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。 观察基线变化。如果冲洗至基线漂移0.01mV/min，噪声为0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。;四）进 样;;第三步、清洗管路及关机;;;;;HPLC;2. 梯度洗脱装置 梯度洗脱是使流动相中含有两种或两种以上不同极性的溶剂，在洗脱过程中连续或 间断改变流动相的组成，以调节它的极性，使每个流出的组分都有合适的容量因子，并使样品中的所有组分可在最短的分析时间内，以适用的分离度获得圆满的选择性分离。 内梯度：利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 外梯度：一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。;高压输液泵;3.. 梯度洗脱装置;（二）进样装置 常见的 进样装置有： 1.隔膜进样 2.停留进样 3.六通进样 4.自动进样;（三）色谱分离系统 色谱柱是色谱仪最重要的部件（心脏）。通常用后壁玻璃管或内壁抛光的不锈钢管制作的，对于一些有腐蚀性的样品且要求耐高压时，可用铜管、铝管或聚四氟乙烯管。 柱子内径一般为1～6 mm。常用的标准柱型是内径为4.6或3.9 mm ，长度为15～30 cm 的直形不锈??柱。填料颗粒度5～10 μm ，柱效以理论塔板数计大约 7000～10000。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。; （三）检测器 1. 紫外吸收检测器 紫外吸收检测器是目前HPLC中应用最广泛的检测器。 2. 光电二极管阵列检测器（PDAD） 3. 示差折光检测器（DRD） 4. 电导检测器 5. 荧光检测器 6. 蒸发激光散射检测器