高效液相色谱法—高效液相色谱法基本原理（仪器分析课件）.pptxVIP

仪器分析模块三 高效液相色谱法项目一高效液相色谱法基本原理 掌握高效液相色谱法的特点目 标01掌握HPLC与GC的区别02掌握HPLC分离原理03相关标题文字 01项目一高效液相色谱法的基本原理-1 ·HPLC的特点·HPLC与GC的比较 ·HPLC分离原理 HPLCHPLC一、概述高效液相色谱法是以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱方法。 1.经典LC与HPLC比较高效液相色谱法（HPLC） 高效液相色谱法（HPLC）2.高效液相色谱法特点：高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便 3.与气相色谱法比较，HPLC的优点（1）分析对象广 气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。优点HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 与气相色谱法比较，HPLC的优点（2）流动相对分离起作用 气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。（3）经常在室温条件下操作 气相色谱法一般在较高温度下进行优点HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 二、液相色谱分离原理及分类液相色谱分离原理：液相色谱的分离系统也由两相—固定相和流动相组成。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱中。根据各组分在固定相及流动相中吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子与溶剂（流动相）及固定相分子间的作用力，作用力的大小，决定色谱过程的分离行为。1.分离原理HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 二、液相色谱分离原理及分类根据分离机理可分为：（1）液－固吸附色谱法（2）液－液分配色谱法、（3）离子色谱法和凝胶色谱法。2.分类HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 仪器分析模块三 高效液相色谱法项目一高效液相色谱法 目 标掌握高效液相色谱法分离类型01掌握高效液相色谱法各分离原理02相关标题文字 01项目一 高效液相色谱法原理-2 ·高效液相色谱法主要分类类型·高效液相色谱法各分离原理 HPLCHPLC高效液相色谱法是以气相色谱为基础，在经典液相色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱方法。 高效液相色谱法（HOLC）高效液相色谱仪的工作流程图 高效液相色谱法的主要分离类型1. 基本原理：利用溶质分子占据固定相表面吸附活性中心能力的差异 .2. 固定相：是固体吸附剂，有下列两类：极性（硅胶、氧化铝）、非极性（活性炭）。3. 液固吸附色谱流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。一、液固吸附色谱法HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 高效液相色谱法的主要分离类型3.流动相的基本要求：⑴ 能溶解被分离的样品⑵ 与所用检测器相匹配⑶ 粘度尽可能小，以获得高的柱效⑷ 价格便宜、毒性小、易于纯化一、液固吸附色谱法HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 高效液相色谱法的主要分离类型4.流动相的基本要求：流动相的选择原则：极性大的试样用极性较强的流动相；极性小的则用低极性流动相。一、液固吸附色谱法HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC） 1. 基本原理主要基于样品分子在流动相和固定相间的溶解度不同（分配作用）而实现分离的液相色谱分离模式。分析对象：分析同系物及含有不同官能团的多组分的混合物。2. 固定相固定相是固定液涂抹在载体上制成。载体有全多孔型载体、表面多孔型载体、全多孔型离子载体；固定液：β,β-氧二丙腈，聚乙二醇，十八烷和角鲨烷。3. 流动相要求：对固定相的溶解度尽可能小。对于亲水性固定液，应选择疏水性流动相；反之，相反。二. 液-液分配色谱HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法的主要分离类型 化学键合相色谱是在化学键合固定相上进行物质分离的一种液相色谱方法。化学键合固定相：以化学反应的方法将功能分子结合到惰性载体上(全多孔或薄壳型微粒硅胶)。化学键合固定相分类：根据在硅胶表面 (具有≡Si－OH基团) 的化学反应不同，键合固定相可分为：硅氧碳键型 ( ≡ Si－O－C ) ；硅氧硅碳键型 (≡Si－O－Si－C ) 硅碳键型（≡Si－C）和硅氮键型（≡Si－N）四种类型。三. 化学键合相色谱HPLCHPLC高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法的主要分离类型 1. 离子交换色谱的分离原理在离子交换色谱中，样品离子对离子交换剂上带固定电荷的活性交换基团之间发生离子交换，不同的样品离子对离子交换剂的亲和力不同，或者说相互作用不同，作用弱的溶质不易被保留，先从柱中被冲洗出来，反之，作用强的，保留较长，较晚淋洗出来。2. 固定相：阳离子交