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纤维蛋白原对布鲁杆菌抗体检测方法的影响 布鲁菌病（简称布病）是由布鲁菌感染引起的。这种疾病对广大农牧区人民的健康和畜牧业的发展构成了严重威胁，并引起了巨大的受欢迎程度。布病的明确诊断除了有流行病学接触史、临床表现外, 实验室检测起着至关重要的作用。当前由于布鲁杆菌培养检出率低、时间长、感染风险高等因素, 使得布鲁杆菌抗体的检测成为布病最主要检测方法。目前布鲁杆菌抗体检测方法有许多, 如虎红平板凝集试验 (RBPT) 、试管凝集试验 (SAT) 、2-巯基乙醇处理后试管凝集试验 (2-ME) 、抗人球蛋白试验 (Coomb’s) 、金标法、ELISA法等, 本文旨在观察纤维蛋白原对几种布鲁杆菌抗体检测方法的影响。 1 研究数据 1.1 患者性别、年龄及监测标准 布鲁杆菌感染组来源于2011年10—11月我院布氏杆菌病科门诊及病房10例患者, 年龄18～57岁。均根据布鲁菌病诊断标准WS269-2007、布鲁菌病监测标准BG16885-1997及《布鲁氏病防治手册》确诊;非布鲁杆菌感染组来源于2011年11月我院健康体检者及住院患者。 1.2 抗体人国内碳源 布病虎红平板凝集抗原、布病试管凝集抗原、冻干抗人球蛋白血清均由中国CDC传染病所提供; 2-巯基乙醇由上海国药集团化学试剂有限公司提供。 1.3 实验方法及仪器 虎红平板凝集实验使用卡片凝集法; 试管凝集试验、半胱氨酸凝集实验、抗人球蛋白实验均采用试管凝集法。严格按照《实用临床布鲁氏菌病》第2版布鲁菌病实验室诊断内容操作。 2 结果 2.1 布鲁菌抗体试验的结果 10例布病患者及5例正常健康体检者分别用血清及血浆检测布鲁杆菌抗体结果见表1。 2.2 抗凝剂对布鲁菌对抗红棕色试验的影响 5例健康体检者分别用血清、血清+枸橼酸钠抗凝剂、血浆 (枸橼酸钠抗凝) 做虎红试验结果见表2。 2.3 不同含量的纤维原组血浆与虎红试剂反应的结果 见表3。 3 虎红平板凝集试验 布鲁杆菌抗体检测当前仍是布病临床诊断的重要手段。 本研究主要采用了当前在临床上常用的几种方法:虎红平板凝集试验、试管凝集试验、半胱氨酸处理后试管凝集试验、抗人球蛋白试管凝集试验。同一患者或健康体检者的血清和血浆分别用4种布病抗体检测方法检测, 其结果为:对于试管凝集试验、2-巯基乙醇处理后试管凝集试验、抗人球蛋白试验, 血清组与血浆组所得结果一致, 说明纤维蛋白原对上述3种试验无影响。但是虎红平板凝集试验, 血清组和血浆组有很大差别。为了排除抗凝剂对试验的影响, 进行了试验2, 结果显示抗凝剂对虎红试验无干扰。为了进一步验证纤维蛋白原可以与虎红试剂产生凝集反应, 又进行了试验3, 结果显示纤维蛋白原含量越高的组与虎红试剂发生凝集越快而且也越强, 从而可知纤维蛋白原可以与虎红平板凝集抗原产生凝集反应。 布病虎红平板凝集试验抗原系用抗原性良好的布鲁杆菌株在适宜培养基上培养收获菌体, 经加热灭活, 离心后用虎红染料染色, 悬浮于乳酸缓冲液制成。虎红又被称为四氯四碘荧光素或孟加拉红, 可用为食用色素或染色剂。在乳酸性缓冲液中虎红带负电荷。人血液中纤维蛋白原是相对分子质量为340 000的生物大分子, 是由3对α、β及γ肽链组成, 纤维蛋白原的生物大分子的肽链N端所带正电荷可以与带负电荷的虎红发生非特异的静电结合, 从而形成了肉眼可见的非特异性的超分子显色反应。 虎红平板凝集试验因它能抑制引起非特异性反应的IgM和增强特异性IgG的活性, 其反应敏感稳定, 特异性优于试管凝集试验。因此, 这种试验在很多国家被推广使用, 已成为临床常规诊断方法之一。在我国大多数医院中, 由于布病仅是一些高发地区常见的疾病, 因此布病的抗体检测也仅使用虎红平板凝集试验, 此时检测标本应该为血清标本, 如果标本中含有纤维蛋白原很可能得到假阳性的检测结果。