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放射菌发酵条件优化研究 优雅辐射布雷as3。2278是培育豆腐菊的优良菌株。它在中国传统食品中的独特味道的形成中发挥着极其重要的作用。但是,目前对于这一有益的毛霉菌种的相关研究却少见报道。对腐乳生产上应用的其它毛霉菌种的研究也主要集中在菌种选育、固体培养条件下的生理特征等方面、、,在液体培养下的生长特征、生理特征的相关报道极少。为了全面地了解雅致放射毛霉的生长生理特点,为腐乳独特风味的形成机理研究提供理论依据,同时为了彻底改造腐乳生产的传统工艺,将现代发酵工程技术应用于腐乳生产,实现用毛霉液体深层培养技术制取菌种来替代传统的固体及浅盘式液体培养技术,我们进行了雅致放射毛霉液体深层培养的一系列研究,现将其发酵条件及发酵培养基的优化研究结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 试验中的细菌 雅致放射毛霉(Actinomucor elegans)AS 3.2278,由北京市王致和食品集团有限公司王致和食品厂提供。 1.2 水溶性氮源 水溶性碳源:葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉、饴糖; 水溶性氮源:硝酸铵、硫酸铵、蛋白胨、酵母膏; 粗料培养基成分:黄豆粉、麸皮均采用浸煮液的形式。 1.3 自然ph值的测定 斜面培养基:PDA培养基,自然pH值; 基础培养基:酵母膏2%、葡萄糖1%、硫酸镁0.2%、磷酸二氢钾0.2%,自然pH值; 发酵条件试验培养基:黄豆粉2%、葡萄糖1%、无机盐0.1%、酵母膏0.2%。 1.4 菌种zea 摇瓶培养:500mL三角瓶装液量200mL,250mL摇瓶装液量100mL,接入1cm2斜面菌块,采用28℃、200r/min恒温振荡培养64h。 1.5 测量 菌丝干重测定:用80目铜网过滤收集菌丝体,清水冲洗,80℃烘干至恒重。 pH值测定:用精密pH试纸测定。 2 结果与分析 2.1 活塞锁发酵培养基的优化 2.1.1 不同碳源的生长和利用的稳定性 在去除葡萄糖的基础培养基中,分别添加浓度为1%的6种碳源,以添加葡萄糖的培养基为对照,每处理三个平行,测定菌丝干重,并进行方差分析及多重比较,最后结果见表1。 由表1可见,雅致放射毛霉在这六种碳源中均能生长,方差分析显示P0.05,六种碳源的菌丝生物量间存在极显著差异。其对可溶性淀粉的利用最好,并能很好地利用葡萄糖、果糖、麦芽糖这些还原糖,对三者的利用不存在显著差异,对蔗糖和乳糖的利用较次。考虑到原料来源及成本问题,我们选用富含麦芽糖的饴糖作为碳源,并进行了相同条件下的重复试验,菌丝体平均干重为0.5647g/100mL。 2.1.2 三角瓶生长情况测定结果 在1%饴糖、0.2%无机盐的液体培养基内,分别添加6种不同的氮源,浓度为2%。以添加酵母膏的培养基为对照。每样三个平行,500mL三角瓶振荡培养,测定菌丝体干重并分析结果见表2。 如表2所示,雅致放射毛霉在除了硫酸铵之外的其它供试氮源中均能生长,但其生长情况差异极大(P0.01)它能极好地利用黄豆粉,也可很好地利用酵母膏蛋白胨这些有机复合氮源。但对无机氮源的利用远远次于对有机氮源的利用。同时雅放放射毛霉也可利用一定的硝酸盐,在麸皮浸煮液中不能很好地生长可能是由于其浸煮液中含氮量较少的原因。 2.1.3 教学用人工培养基 以2%黄豆粉、1%饴糖为基本液体培养基,分别添加不同的浓度为0.2%的无机盐,以不加无机盐的培养基为对照,每组设三个平行进行培养,结果见表3。 由表可知,硫酸镁和磷酸二氢钾的添加可对菌丝的生长起显著促进作用,硫酸钙也有一定作用,但在本实验中未与对照形成显著差异。 2.1.4 正交实验结果 以饴糖作为碳源,黄豆粉、酵母膏作为氮源,硫酸镁和磷酸二氢钾作无机盐,按L9(34)设计三水平四因素实验。九个组合,三次重复。采用250mL摇瓶置旋转式摇床培养(表4)。正交实验结果及极差分析见表5。 由表可知,在此设置的范围内,影响菌丝生长量最显著的因子为黄豆粉,其次依次为饴糖、无机盐、酵母膏。同时我们根据对其发酵周期、生长状况、蛋白酶活性的综合分析选定最适培养基为:黄豆粉3%、饴糖0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.2%、酵母膏0.1%。 2.2 活塞锁发酵条件试验 2.2.1 把握最佳生长区域的确定 将灭菌前培养基的pH值分别调到3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0、12.0、13.0,每处理三个重复,摇瓶培养64h。结果(见图1)表明雅致放射毛霉在pH5.0~13.0范围的液体培养基内均可生长,以6.0~7.0为最适。方差分析差异极显著(P0.01)。 2.2.2 摇瓶培养的培养 用500mL三角瓶分别装入50、100、150、200、250、300mL的培养基进行摇瓶培养,每个处理设三个重复。结果表明(图2),在100mL~300mL间菌丝产量