电泳技术—典型的电泳技术及应用（药物分离纯化课件）.pptx

药物分离与纯化技术课程 电泳技术--等电聚焦电泳 等电聚焦电泳—电泳技术大纲1.等电聚焦电泳概念2.等电聚焦电泳特点3.等电聚焦操作 等电聚焦电泳—电泳技术 将等电点不同的蛋白质混合物加入有pH值梯度的凝胶介质中，在电场内经过一段时间后，各组分将分别聚焦在各自等电点相应的pH值位置上，最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。（一）等电聚焦电泳概念 等电聚焦电泳—电泳技术①使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定、连续、线性的pH梯度；②由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰、鲜明的区带界面；③电泳速度快;④分辨率高;（二）等电聚焦电泳特点 等电聚焦电泳—电泳技术⑤加入样品的位置可任意选择；⑥可用于测定蛋白质类物质的等电点;⑦适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。（二）等电聚焦电泳特点 等电聚焦电泳—电泳技术 （1）凝胶 配制：凝胶浓度T为5％-7.5％ （2）加样：任意位置（三）等电聚焦电泳操作 等电聚焦电泳—电泳技术（3）电泳 ①开始电泳时恒压60V，15min，目的在于使小分子的，泳动快的载体两性电解质可在短时间内形成一个粗略的pH梯度。 ②此后，恒流为8mA，是为了避免电泳开始时介质中带电颗粒较多，电泳电流过高而破坏凝胶。（三）等电聚焦电泳操作 等电聚焦电泳—电泳技术③当各种蛋白质逐渐泳动，到各自等电点位置时，带电颗粒逐渐减