电泳技术及其在分子生物学中的应用.pptVIP

在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，同时，在强还原剂（beta-巯基乙醇）作用下，使半胱氨酸之间的二硫键断裂。 蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中，与SDS分子按比例结合(多肽和SDS的质量比为1:1.4)，形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物，所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，从而消除了不同分子之间原有的电荷差异 。 第二十九页，共五十三页，2022年，8月28日 蛋白质-SDS复合物的形状近似于长的椭圆棒，它们的短轴是恒定的，而长轴与蛋白质分子量的大小成比例。 因此，蛋白质-SDS复合物在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中的迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于椭圆棒的长轴长度，即蛋白质亚基分子量的大小。 当蛋白质分子量在15KD到200KD之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈线性关系。 第三十页，共五十三页，2022年，8月28日 特点 大多在不连续缓冲体系中进行，其电泳槽缓冲液的pH值与离子强度不同于配胶缓冲液； 不连续缓冲体系具有把样品中的复合物全部浓缩于极小体积的能力，故提高了SDS的分辨力； 系统中所有组分都含有0.1%的SDS。 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS） 第三十一页，共五十三页，2022年，8月28日 负极 积层胶 分离