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2022年高考生物总复习：限制酶的选择及目的基因的检测与鉴定 【例证1】(2016■全国课标卷III,40)图(a)中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRIBamHI和Sau3AI三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图(b)为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRl、Sau3AI的切点是唯一的)。 GAAITC——GGAIVC——一GATC —CTTAAG—CCTAGGCTAG 图3) L；命子JgRI心XI复制原点《》露止「 抗生泰抗性堡因 图 根据基因工程的有关知识，回答下列问题：⑴经BamHI酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产物连接，理由是若某人利用图(b)所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组DNA分子，如图(c)所示，这三种重组DNA分子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有，不能表达的原因是 甲乙月基因图(c) DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有和其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是。 ［慧眼识图获取信息］三种限制酶切割结果分析ErwEi|切割启的黏性末踹fJcrmH1切割后俄］黏性末端 —OAATTC——GGATtJc— -CTTAAG——CCTAGG— StnMI切割后巾勺菇性末端: —GATC—； 侦*药一此博类黏性末端A可相互“配对成可连接一（2）表达载体与重组DNA分子分析 甲乙丙基出由此可见,只有乙所示目的基因其首端为.口动孑?.尾端癖止子，故其能正常表达」答案（1）%〃3AI两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端（2）甲、丙甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录（3）Eco〃DNA连接酶T4DNA连接酶T4DNA连接酶【例证2】（2016?江苏卷，33）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题: 限制辑 T Bd1 Sau^AI 识别序 列及切 割位点 GGATCC CCTAGG tgAT匚A ACTAGTt ViATC CTAG A’AGTTt TTCGA wI-r~岛相船|III1/引物丙『物乙I|的基因T wI-r~岛相船| III 1/引物丙『物乙I|的基因T混Al 为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中若BamHI酶切的DNA末端与BclI酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为，对于该部位，这两种酶(填“都能”、“都不能”或“只有一种能”)切开。 若用Sau3AI切图1质粒最多可能获得种大小不同的DNA片段。 A名叶支招首先看目的基因两侧有何种切割位点以保障能将目的基因“切出”如图2使用BamHI、Bcl可切断左侧，Hindlll、Sau3AI可切断右侧再回扣“质粒”，看质粒中限制酶切割位点，如图中总共有BamHI、BclIBamHI及Hindlll四个限制酶识别位点，其中并不存在诸如目的基因中Sau3AI酶识别位点，故不选Sau3AI酶，而BamHI在四环素抗性基因与氨苄青霉素抗性基因中均存在，倘若使用该酶将会导致两个标记基因同时被破坏，故只能选择Bcl与Hindlll，而使用此两类酶将导致氨苄青霉素抗性基因遭破坏，因此制备重组质粒选择培养基时只能依据“四环素抗性基因”，如下图所示： 若使用此町导致四-个标记基因“1时透破玮 四环参莉性基因.质粒此两类制啊导,致“氮芾青寄素、抗性职1妒迫岐还 四环参莉性基因 .质粒 此两类制啊导 ,致“氮芾青寄素 、抗性职1妒迫岐还 k壁」 散节青￥徵裁*; 抗恤病 使用此类酶订切 、断匝粒殳目的基H泌IK七微 LSJF 困1 此两引物可沿相反方囱合成子仙 ILH 此外，根据BamHI和BclI的酶切位点，BamHI酶切的DNA末端与BclI酶 TGATCC(GGATCA\切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为ALTAL」LLTALT ACTAGGCCTAGTy与两种酶的酶切位点均不同。又根据BamHI、BclI和Sau3AI的酶切位点，Sau3AI在质粒上有三个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用Sau3AI切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。 答案(1)BclI和HindlllDNA连接感受(2)四环素引物甲和引物丙 TGATCC(GGATCA\⑶acta都不能(4)7 ACTAGGCCTAGTJ