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细胞计数与活力测定 实验报告 一、实验目的 1.学习、掌握细胞培养中最基本的细胞计数方法 2.学会血球计数板的使用方法 二、实验原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞，由于活细胞的细胞膜完整，染料无法渗入，活细胞不着色，死细胞着色，从而可以区分死细胞与活细胞。计算细胞活力：活细胞数／（活细胞＋死细胞）＊100%. 四个角落的正方形深度为0.1mm，盖上盖玻片后体积为1mm?1mm?0.1mm 细胞数目/ml=4大格细胞总数/4?稀释倍数?10^4 三、实验方法 1. 将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。 2. 将细胞悬液以10微升加入试管中，加入2微升 0. 4%台盼兰染液，染色2-3分钟。 3. 将细胞悬液吸出10微升，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。 4. 静置3分钟。 5. 镜下观察，分别读出计数板四大格中死细胞数和活细胞数，计算细胞数目和细胞活力。 注意事项 1.若细胞位于线上，只计左侧和上方的（或右侧和下方的）。 2.计数板计数时，最适浓度为5~10*105个／mL,此范围外计数误差偏大，需要重新稀释。 3.计数应在台盼蓝染色数分钟内完成，随时间延长，部分活细胞也开始摄取染料、因为台盼4.蓝对蛋白质有很强的亲和力，用不含血清的稀释液，可以使染色计数更准确。