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[doc] 曼氏血吸虫感染小鼠对岩藻糖基化N—乙酰乳糖多聚糖的抗体应答及该聚糖在血吸虫中的表达 曼氏血吸虫感染小鼠对岩藻糖基化N—乙 酰乳糖多聚糖的抗体应答及该聚糖在血吸 虫中的表达 ? 126 Depre等比较了3株曼氏血吸虫(Sin)的 mtDNA,发现了mtDNA在长度上的极太差 异和两种限制酶的限制图谱的位置差异,并 证明mtDNA是研究血吸虫差异的有效工 具.通过PCR扩增和直接测序,获得了日本 血吸虫(sj)和Sm的细胞色素c氧化酶亚基 1(CO1)基因的372bp的片段和Sj尼克酰胺 脱氢酶复合物1(ND1)基因的474bp的片 段;并比较了sj不同分离株的CO1和ND1 基因,发现变异率极低.另外还扩增了几种 血吸虫的l:ntIsrRNA基因的一部分,随着对 血吸虫nat基因组研究的深入,已获得超过 Smmt基因组编码区一半的8068bp的序 列.经进一步的亚克隆,得到了IsrRNA和 ssrRNA亚基,CO2,,ND4,ND6和 ATP6基因及预期的22种tRNA中的l0种 完整序列与CO1,ND2及cytb基因的不完整 序列.Smmt基因组中存在一个有重复的, 长的非编码区.该区域是一个太小分别为 558bp和62bp的两种类型的重复成份组成 的太的多态性微卫星.在血吸虫基因组研究 中,现已从和Sm不同发育时期的定向 eDNA文库的随机选择的克隆的5末端获得 约10000个ESTs,其中1%与已知的nit DNA基因相匹配.编码血吸虫mt基因的主 要EST是从?l,CO2,CO3,IsrRNA和ND 复合物的部分序列获得的.这为基因问 PcR设计引物,扩增完整的mt基因开创了 一 个良好的开端. 目前获取血吸虫mtDNA序列所采用的 主要方法是以比较保守的基因片段为基础设 计引物,扩增基因内甚至跨越两个或一组基 因的mt基因组的靶序列;与直接克隆法一 起可获得完整的血吸虫线粒体基因组,从而 为获取nitDNA序列奠定基础.不同的血吸 虫的完整mtDNA序列的有效性,将有助于 深入研究血吸虫的遗传差异. (袁仕善摘陈家旭校) 2002年5月第29券第3期 081曼氏血吸虫感染小鼠对岩藻糖基化N_ 乙酰乳糖多聚糖的抗体应答及该聚糖在血吸 虫中的表达[英]/NyameAK…?ExpPara. sito1.一2ooO.96(4).一202--212 寄生蠕虫的感染可诱导产生针对碳水化 合物抗原的体液免疫应答,提示该类抗原可 用于疫苗或新的血清学诊断方法的研究.已 证实,血吸虫中的聚糖可作为宿主体液免疫 应答的主要靶抗原.为鉴定聚糖分子中的抗 原性片段,已对血吸虫的糖蛋白和糖脂中的 聚糖结构进行了大量研究.但对直接决定其 抗原性的糖链组成和结构目前尚知之甚少, 限制了此类研究的进一步发展. 本研究用人乳寡糖LNnT为原料,糖_核 苷酸作为糖基供体,哺乳动物来源的糖基转 移酶催化,用酶促方法合成LDNFP,这是一 种五糖单天线结构,其末端具有单链的岩藻 糖基化N一乙酰乳糖(LDNF)序列.将LD- NFP耦联到BSA上,形成一种新型糖蛋白 LDNFP-BSA.用LDNFP-BSA糖蛋白包被 微孔板,ELISA法检测曼氏血吸虫感染小鼠 的血清中抗LDNF抗体及其类别,结果显 示:感染8周后的小鼠血清中含有抗LDFN 的lgM,IgG和IgA,而未感染小鼠则未检测 到相应抗体.IgM,IgC和IgA的抗体滴度 分别为1:6400,1:12800和1:3200.同时 还对IgE抗体进行了检测,结果显示:感染小 鼠血清中含有抗LDNF的IgE抗体,滴度大 于1:1000,而未感染小鼠则未检测到相应抗 体.作者还对抗LDNF的IgG抗体的类型 进行了鉴定,结果显示:IgG类抗体主要为 IgCl和IgG3亚类,而补体结合型的IgG2a 和IgG2b抗体未测到.提示针对LDNF的 抗体反应主要为Th2型,与通常报道的血吸 虫感染的小鼠与人的抗体反应类型一致.总 的来说,血吸虫感染小鼠可针对LDNF抗原 产生广泛的包括各种抗体在内的免疫应答. 为进一步深入研究LDNF,作者还构建 了抗LDNF的单克隆抗体SMLDNFI.将一 国医生置生虫垃!l!} 系列稀释度的SMLDNF1单抗与不同的碳 水化合物抗原反应以检测其特异性和敏感 性.结果显示,该单抗只与LDNFP-BSA结 合,滴度达1:100000.而与其他包括LDN- 和一在内的多糖抗原不起反应. 为评估LDNF作为保护性免疫靶抗原 的潜在可能性,作者用SMLDNF1对LDNF 进行了免疫细胞化学染色定位