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光激化学发光均相免疫分析技术的应用与发展趋势 广州免疫传感器技术是近年来开发的一种快速改进的技术。它利用了抗剂和抗体之间高度特异性的识别和反应组合，检测生物分子。具有灵活性强、特异性强、应用广泛、所需设备简单、线性强等优点。已成为当前最具竞争力和挑战的分析技术之一，广泛应用于生物科学、临床医学、环境、食品、药物等领域。1-3.目前，免疫传感器技术主要采用孔板实验平台的非均匀相位分析模式，需要进行多步操作，如合并、洗脱和分离。分析过程复杂，分析周期长，不能满足快速检测和诊断的要求。为了提高发光免疫分析的效率并简化其步骤，近年来，光激化学发光自相免疫分析（loci）的概念得到了应用。该技术有效避免了洗脱和分离等复杂步骤，显著提高了分析效率和竞争力，并大多数地应用于传统的非均质免疫分析领域。 LOCI于1994 年由美国科学家Ullman［7］提出, 随后Perkin Elmer公司推出Alpha Sreen、Alpha Lisa以及LANCE等技术的LOCI检测仪器. 随着技术的推广, Amersham等公司也相继推出相关技术的检测平台. 经过20 年的发展, 在商用设备广泛应用的基础上, LOCI技术在生物医学、药物学、食品安全以及检验检疫等领域都得到了快速发展. LOCI方法以纳米传感技术为基础, 结合了激光技术、化学发光传感技术和免疫分析技术, 利用纳米级的微珠来进行生物分子的传感检测. 供体纳米微珠填充有光敏剂和抗体, 受体纳米微珠填充有化学发光剂和抗体 ( 如图1［8］所示) , 如果样品中存在待测抗原分子, 供体微珠和受体微珠会由于抗体抗原的特异性结合而相互接近, 从而形成桥式耦合的供体-受体连接结构.在受激光激发后, 由于纳米供体微珠表面光敏物质的作用, 使溶液中的氧气变成较为活跃的单体氧, 其半衰期为4 μs, 因此扩散范围只有200 nm. 当微珠对形成桥式结构, 单体氧能够被纳米受体微珠接收, 并引起连串反应, 最终诱发包被在受体微珠表面的物质发生化学发光反应产生520 ~ 620 nm的荧光信号, 进而实现高灵敏度检测. LOCI技术采用均相反应模式, 整个反应过程不需要进行任何分离洗涤步骤, 极大地提高了检测效率, 并为全自动化检测提供可行性. 基于LOCI的原理, 单体氧在溶液中具有200 nm的扩散范围, 因此该技术能够对生物大分子, 如完整的生物蛋白质, 以及对复杂相互作用进行检测, 并且引入纳米级的微珠作为标志物, 极大地增加了反应的比表面积, 从而可高效接触待测生物分子, 加大反应概率和速度. 诸多优势为LOCI在多个领域的广泛应用奠定了基础, 本文尝试对LOCI技术在生物医学、药物学、食品安全和检验检疫等领域的最新应用进行综述, 并根据不同学科特点探讨其发展趋势. 1 loci技术引入抗体反应并耦合疾病标记物以及在信号 近年来, 随着后基因组学的发展, 生物标志物的检测为重大疾病的早期诊断提供了有力佐证, 而免疫检测技术作为生物标志物检测的最有效手段, 在生物医学领域中得到广泛应用, 主要集中于重大疾病的检测方面, 利用抗体与疾病标记物进行特异性反应, 同时耦合利于信号转换或者放大的标记物, 通过信号的检测便能获得分析物中疾病标记物的含量. LOCI技术引入免疫标记后的纳米粒子作为探针, 通过特异性抗原抗体反应, 有效捕捉分析物中的疾病标记物; 同时, 该技术可极大地拉近纳米粒子间的距离, 并通过纳米粒子传导产生多级放大的化学发光反应, 将信号联级放大最终以荧光的形式展现. 因此, LOCI技术具备极高的检测灵敏度及特异性, 为生物医学应用提供一种高效诊断工具. 1.1 t-probnp检测 心力衰竭是心脏病的严重阶段疾病, 发病率高, 5年内的存活率与恶性肿瘤相似, 因此其早期检测对患者治疗以及提高存活率具有重要作用. 氨基末端脑钠肽 ( NT-pro BNP) 是心力衰竭公认的标记物［9-10］. Gruson等［11］使用包被着化学发光染料的受体纳米微珠耦合特异性抗体与包被光敏物质的生物素化纳米微珠, 同时结合生物素化的特异性抗体, 捕捉血清中NT-pro B-NP抗原, 首次利用LOCI技术检测了70 个心力衰竭病人血清中的NT-pro BNP含量. Foo等［12］通过LOCI技术检测唾液中的NT-pro BNP含量, 区分出了患者以及健康人群, 表明了LOCI在心力衰竭检测中的良好应用前景. 1.2 loci技术的应用 肿瘤标记物的检测被证明是一种极有前途的肿瘤早期诊断技术, 在临床及生物医学研究中得到广泛的重视. LOCI技术作为一种特异性极高的检测技术, 具有强大的筛选血清等复杂体系分析物成分的能力, 可在复杂基质的干扰下准确识别肿瘤标志物, 因此在癌症早期诊断中具有较大的应用