细菌的血清学及分子生物学检测.pptVIP

细菌感染的非培育检测方法 主要方法免疫学检测分子生物学检测细菌毒素检测动物实验 免疫学检测 Ag+Ab AgAb 用已知抗体或抗原来检测未知抗原抗体 抗体检测已知抗体检测未知抗原：效价（或滴度）的上升诊断血清多价血清单价血清因子血清 抗原检测凝集试验玻片凝集试验乳胶凝集试验反向间接凝集试验SPA协同凝集试验免疫荧光技术ELISA 含A蛋白的金葡菌IgG类抗体结合IgG的金葡菌抗 原凝集协同凝集试验 细菌毒素的检测内毒素的检测：G-细菌感染外毒素的检测：待检菌的鉴定，并区分产毒株与非产毒株 动物实验分离和鉴定病原微生物测定细菌的毒力制备免疫血清建立致病动物模型取动物的血清配制培育基用于生物制品或一些药物的平安、毒性、疗效检验 细菌感染的分子生物学检测 分子诊断极大的节省时间 针对传染病的分子诊断技术被国际权威的《自然》、《科学》杂志列为改善进展中国家人民健康的十大生物技术之首！ 细菌感染的分子生物学检测核酸杂交聚合酶链反应（PCR）生物芯片技术 核酸杂交核酸探针：带有标记物的、能与特定核酸序列发生特异性互补的已知序列核酸片段。核酸杂交方法： 1.斑点杂交 2.菌落原位杂交 3.Southern印迹 4.Northern印迹 核酸杂交在临床微生物检测中的应用细菌分类鉴定细菌快速鉴定细菌耐药性的检测细菌毒素的检测细菌流行病学调查 聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR） PCR扩增产物的分析凝胶电泳分析法斑点杂交法酶谱分析法序列分析法 PCR在临床微生物检验中的应用细菌的快速检测细菌毒素的检测细菌的耐药性的检测细菌流行病学调查 基因芯片技术最早的生物芯片概念源于计算机芯片基本原理：微阵列技术，核苷酸固定到固体支持物上，将处理好的样品与其进行杂交，以实现对所测样品基因的大规模检验。特点：高通量、高集成、微型化、平行化、多样化和自动化1998年度世界10大科技进展之一进展飞快，应用日益广泛 基因芯片应用存在的问题不同实验室结果的比较芯片价格，实验成本微阵列质量掌握MAQC蛋白质芯片的强势挑战自身存在的技术缺陷 蛋白质芯片技术双向凝胶电泳(2-DE)和质谱(MS)分析鉴定技术为蛋白质组学讨论的两大核心技术蛋白质芯片是指以蛋白质分子作为配基,将其固定在固相载体的表面,形成的蛋白质微阵列分类：生物化学型芯片、化学型芯片和缩微芯片蛋白质芯片技术是继基因芯片之后，被称为横扫生物科学和医学界的一次“迷你”革命 分子诊断的质量掌握标准化操作程序（SOP)标准化实验室室内质控和室间质评The FDA is Coming!方法原理、实验步骤、使用指征、报告格式，结果、标本、临床有效性等因素 传统方法目前不行替代快速简便的分子诊断技术越来越普及Jan Weile Cornelius Knabbe；Current applications and future trends of molecular diagnostics in clinical bacteriology；Anal Bioanal Chem (2009) 394:731–742 本章要求掌握的内容细菌感染的病原学诊断方法有哪些？细菌形态学检查包括：不染色标本检查法和染色标本检查法细菌染色常用染料：碱性染料、酸性染料、复合染料常用染色方法：革兰染色、抗酸染色和荧光染色 本章要求掌握的内容常用培育基的种类：基础、营养、鉴别、选择、特殊糖类发酵试验原理：具发酵不同糖的酶。氧化-发酵试验的原理：分解葡萄糖需不需氧分子生物学方法检测细菌的优缺点