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第一页，共十九页，2022年，8月28日 基因工程培育固氮植物的简要过程： 根瘤菌 提取 固氮基因 禾本科细胞(含固氮 基因) 禾本科植株(有固氮特性) 重组 DNA 导入 形成 第二页，共十九页，2022年，8月28日 一.基因工程的概念 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 特点 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 目的基因 DNA分子水平 制造出人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 定向地改造生物的某一性状 第三页，共十九页，2022年，8月28日 特异性，即识别特定核苷酸序列，在特定的切点切割。 (一)限制性内切酶 1.分布： 2.作用部位: 3.特点： 4.切割后的末端形式： 二.基因操作的工具 主要在微生物中。 2种 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 第四页，共十九页，2022年，8月28日 G C T T A A G A A T T C 限制酶 限制酶 第五页，共十九页，2022年，8月28日 G C T T A A G A A T T C 第六页，共十九页，2022年，8月28日 第七页，共十九页，2022年，8月28日 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 第八页，共十九页，2022年，8月28日 练1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A.限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中少 B.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C.不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D.限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键 B 第九页，共十九页，2022年，8月28日 1.要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端。 2.如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端 思维训练 第十页，共十九页，2022年，8月28日 （二）DNA连接酶－－“分子缝合针” 1.作用部位： 二.基因操作的工具 （1）E·coliDNA连接酶 （2）T4DNA连接酶 磷酸二酯键 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，是把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子才能形成。 2.种类： 第十一页，共十九页，2022年，8月28日 （三）基因进入受体细胞的载体－－“分子运输车” 1.使用运载体的目的： 3.条件： 二.基因操作的工具 一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中； 二是利用它在宿主细胞内进行大量的复制。 （1）质粒 （2）λ噬菌体的衍生物 （3）某些动植物病毒 质粒有哪些特点？ 4.运载体的种类： 2.运载体的原理： 利用运载体侵染宿主细胞的特性 第十二页，共十九页，2022年，8月28日 3.作为基因工程使用的载体必需满足以下条件： 1）载体DNA 必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，才不至于因目的基因的插入而失活。 2）载体DNA 必须具备自我复制能力，或整合到受体染色体DNA 上，随染色体DNA 的复制而同步复制。 3）载体DNA必须有标记基因，以便重组后进行筛选。 4）载体DNA 必须是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 第十三页，共十九页，2022年，8月28日 关于质粒 1.细胞染色体（或拟核DNA分子）外能自主复制的小型环状DNA分子； 2.质粒的存在对宿主细胞无影响； 3.质粒的复制只能在宿主细胞内完成; 4.存在与许多细菌及酵母菌中; 5.最常用的运载体,尤其大肠杆菌质粒. 第十四页，共十九页，2022年，8月28日