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第 36 卷 第 3 期 农 业 工 程 学 报 Vol.36 No.3 218 2020 年 2 月 Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering Feb. 2020 模板法制备多孔交联脂肪酶聚集体碳酸钙及其特性 ※ 苗长林，吕鹏梅，王忠铭，李惠文 ，杨玲梅，罗 文 （中国科学院广州能源研究所，中国科学院可再生能源重点实验室， 广东省新能源和可再生能源研究开发与应用重点实验室，广州 510640 ） 摘 要：针对传统交联脂肪酶聚集体（cross-linked lipase aggregates，CLEAs ）表面密实、比表面积小、无太多孔隙结构、 在催化过程中存在扩散限制、影响酶催化效率等问题，该文通过脂肪酶、氯化钙、碳酸钠、硫酸铵共沉淀制备脂肪酶/碳 酸钙微球，再加入二硫苏糖醇（dithiothreitol ，DTT ）进行脂肪酶交联自组装，然后用乙二胺四乙酸二钠(EDTA)去除碳酸 钙模板剂，制得多孔交联脂肪酶聚集体微球（p-CLEAs ），对其制备条件、结构特征、酶学性质进行研究。结果表明，最 佳制备条件为：Ca2+浓度 0.35 mol/L、脂肪酶与 Ca2+ 比例5:1、沉淀剂饱和度 80%、沉淀pH 值为 8 、沉淀时间45 min 、 DTT 体积分数 0.2%、交联时间40 min 。与常规CLEAs 相比，所制备的 p-CLEAs 在甲醇耐受性、热稳定性和 pH 值稳定 性方面均有明显改善，4 ℃保藏 6 个月，仍保持较高的活性。其结构稳定，形貌、孔道尺寸可调控，呈多孔结构，这种 多孔结构使得底物分子更容易进入脂肪酶的活性位点，不仅降低了传质限制，还提高了催化效率，具有较高的催化活性。 关键词：催化剂；酶；交联酶聚集体；脂肪酶；固定化；碳酸钙；多孔 doi ：10.11975/j.issn.1002-6819.2020.03.027 中图分类号：TE667 文献标志码：A 文章编号：1002-6819(2020)-03-0218-09 苗长林，吕鹏梅，王忠铭，李惠文，杨玲梅，罗 文. 模板法制备多孔交联脂肪酶聚集体碳酸钙及其特性[J]. 农业工程 学报，2020，36(3)：218－226. doi ：10.11975/j.issn.1002-6819.2020.03.027 Miao Changlin, Lü Pengmei, Wang Zhongming, Li Huiwen, Yang Lingmei, Luo Wen. Preparation and properties of porous crosslinked lipase polymeric by calcium carbonate template method[J]. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering (Transactions of the CSAE), 2020, 36(3): 218 －226. (in Chinese with English abstract)