常见蛋白酶抑制剂.docx

. . . . 当前位置：生物帮 实验技巧 生物化学技术 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期：2012-06-13 来源：互联网标签： 相关专题：解析蛋白酶活性测定 聚焦蛋白酶研究新进展 摘要 摘要 :破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了 5 种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感 性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5 折生物试剂大促销！ Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了 5 种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白 酶); 10mg/ml 溶于异丙醇中; 在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF 。 EDTA 抑制金属蛋白水解酶; 0.5mol/L水溶液，pH8~9; 溶液在 4℃稳定六个月以上; 4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml); 5)加入 NaOH 调节溶液的pH 值，否则EDTA 不溶解。胃蛋白酶抑制剂(pepstantin) l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D 和凝乳酶; 2)1mg/ml 溶于甲醇中; 3}储存液在 4℃一周内稳定，-20℃稳定 6 个月; 4)1 作浓度:0.7ug/ml(1umol/L) 5)在水中不溶解。 亮抑蛋白酶肽(leupeptin) 1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B; 2)lOmg/ml 溶于水; 储存液 4℃稳定一周，-20℃稳定 6 个月; 工作浓度 0.5mg/ml。 胰蛋白酶抑制剂(aprotinin) 1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶; 2)lOmg/ml 溶于水，pH7~8 3}储存液 4℃稳定一周，-20℃稳定 6 个月; 4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L); 避免反复冻融: 在 pH12.8 时失活。蛋白酶抑制剂混合使用 35ug/ml PMSF… 丝氨酸蛋白酶抑制剂 0.3mg/ml EDTA… 金属蛋白酶抑制剂 0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)… 酸性蛋白酶抑制剂 0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)… 广谱蛋白酶抑制剂 常用蛋白酶抑制剂表 抑制剂Antipain 靶蛋白酶木瓜酶和胰酶 有效浓度50μg/ml 储藏溶液1mg/ml 水溶液 注解 对胰凝蛋白酶，胃液素，纤溶酶无影响 APMSF 胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶 10-40μg/ml 或10-20μM 100mmol/L 水溶液 毒性比 PMSF 低，不 能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶 抑肽酶抑氨肽酶 B 丝氨酸蛋白酶氨基肽酶 0.06-2μg/ml 40μg/ml 10mg/mlPBS 溶液溶于甲醇 避免反复动冻融不能抑制羧肽酶 Calpain 抑制剂Ⅰ、 Calpain (钙依赖性 Ⅰ:17μg/ml 溶于乙醇 可渗透薄膜 Ⅱ 抑糜朊酶素 半胱氨酸蛋白酶) 胰凝乳蛋白酶 Ⅱ:7μg/ml 6-60μg/ml  溶于 DMSO B.M.综合酶片 丝氨酸，半胱氨酸和每 10-50ml 细胞提 不含 EDTA 金属蛋白酶 EDTA 金属蛋白酶 抑蛋白酶醛肽 丝氨酸蛋白酶，巯基 蛋白酶 取液内加一片0.2-0.5mg/ml 或0.5-1.3μmol/L 0.5-2μg/ml  500mmol/L 水溶液pH=8.0 10mg/ml 水溶液 a2-巨球蛋白Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim) 广谱 丝氨酸蛋白酶 1∪/ml 0.1-1.0mg/ml 或0.4-4mmol/L 100∪/ml PBS 溶液 避免接触还原剂 100mM 水溶液 无毒，在中性 pH 下 较 PMSF