高效毛细管电泳法分离盐酸尼卡地平等6种药物对映体.docxVIP

高效毛细管电泳法分离盐酸尼卡地平等6种药物对映体 色度法是分离手性药物的首选方法。其中，高效液相色度法在目前的应用中发挥着主导作用，但手性固定相价格高、类型少、柱效率低，无法满足各种手性药物的分离需求。与高效液相色谱法相比,毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE )具有分离效率高、分析速度快、样品用量少、运行成本低、有多种分离模式可供选择、抗污染能力强等优点,已发展成为分离科学中最活跃的技术之一。环糊精(cyclodextrins,CDs )及其各种衍生物(CD derivatives)是 CE分离中最常用的缓冲液添加剂,在手性拆分领域获得了巨大成功。经检索,目前还未见有关使用羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD)为手性选择剂,用CE分离盐酸尼卡地平、盐酸曲马多、酮康唑、氧氟沙星、阿替洛尔、盐酸特布他林对映体的文献报道。因此,本文作者使用CM-β-CD作为CE背景电解质添加剂,对上述6种药物进行了对映体拆分研究。考察了CM-β-CD浓度、pH、缓冲盐浓度等因素对分离的影响;考察了在含有CM-β-CD的背景电解质中加入离子液体对对映体分离的影响;最后,对分离机理进行了探讨。6种药物的化学结构式见图1。 1 phs-3dc精密数显酸度计 CL1030毛细管电泳仪(CL101A高压电源、CL1030紫外检测器、HW-2000色谱工作站,北京彩陆科学仪器公司),pHS-3DC精密数显酸度计(上海科学公司)。 弹性石英毛细管柱(50 cm×50 μm,i.d.,有效长度41 cm,河北永年光导纤维厂),羧甲基-β-环糊精(CM-β-CD,天津博迪化工有限公司),盐酸尼卡地平、盐酸曲马多、酮康唑、氧氟沙星、阿替洛尔和盐酸特布他林对照品(中国药品生物制品检定所),其余试剂(分析纯,市售),水为二次重蒸水(自制)。 2 方法和结果 2.1 内标液、内酰胺盐酸钠zea、c.4. 背景电解质:配制30 mmol·L-1NaH2PO4缓冲溶液,加入一定量的CM-β-CD,用H3PO4调节至所需pH值,经0.45 μm微孔滤膜过滤,备用;进样方式:重力进样5 s,高度差10 cm;分离电压:20 kV;检测波长:盐酸尼卡地平、盐酸曲马多、酮康唑230 nm,氧氟沙星、阿替洛尔、盐酸特布他林270 nm;丙酮作为中性标记物;温度:室温。 新毛细管柱用1.0 mol·L-1NaOH溶液冲洗10 min,然后用蒸馏水冲洗5 min。实验开始前,依次用0.1 mol·L-1NaOH溶液、水、背景电解质冲洗10 min。进样间用背景电解质溶液冲洗3 min后进行下次进样。 2.2 对照品溶液的制备 分别取酮康唑、盐酸曲马多、盐酸尼卡地平、阿替洛尔、盐酸特布他林和氧氟沙星对照品5.0 mg,用少量甲醇溶解并用水定容为10 mL。取2 mL该溶液用水稀释为10 mL,制成质量浓度为0.1 g·L-1的对照溶液。 2.3 选择不同的条件 2.3.1 cm--cd质量浓度的影响 根据Wren等建立的毛细管区带电泳(CD-CZE)体系手性分离的数学理论模型,存在一个最佳手性选择剂浓度,能获得最大的分离度。因此,本文作者首先在pH值3.0、30 mmol·L-1NaH2PO4缓冲溶液条件下,考察了CM-β-CD质量浓度分别为10、15、20、30 g·L-1时对6种药物对映体分离度的影响,结果见图2。从图2可见,当CM-β-CD质量浓度增加时,盐酸尼卡地平、盐酸曲马多、酮康唑、阿替洛尔、盐酸特布他林的分离度变化不大,但氧氟沙星的分离度随手性选择剂质量浓度的改变有明显变化。同时也能看到,氧氟沙星的迁移时间随CM-β-CD的增加也有显著增加(图3)。综合考虑迁移时间和分离度,选择CM-β-CD质量浓度为15 g·L-1继续研究。 2.3.2 ph值对耦合作用的影响 pH值是影响毛细管电泳手性药物分离的重要参数。pH值对分离的影响主要包括:影响石英毛细管内壁双电子层的厚度,从而影响EOF;影响手性药物的解离状态,对于碱性药物来说,pH值影响手性药物氨基官能团的质子化程度;影响CM-β-CD的解离状态,即影响CM-β-CD的羧基的解离程度。因此,pH值影响手性分子与CM-β-CD疏水性空腔的匹配及手性分子CM-β-CD上的官能团之间的多种相互作用力,如静电作用、氢键作用等。 作者在30 mmol·L-1NaH2PO4缓冲溶液中,加入15 g·L-1CM-β-CD,考察了pH值分别为2.5、3.0、3.5、4.0和4.5时对参数分离时间(t)、对映体选择因子(α)和分离度(R)的影响,结果见表1。由表1可知,随着pH值增加,各对映体的分离度均出现先增加后减小的趋势:在pH值3.0时,盐酸特布他林对映体的分离度达到最大;在pH值3.5时,盐酸尼卡地平、酮