三氟乙酸水解.docxVIP

水解方法1(毛头鬼伞菌丝体粗提物的制备)取2mg多糖样品放入薄壁长试管中，加入2mol/L三氟乙酸(TFA)4mL,在110°C下水解多糖样品水解2h后，取试管内溶液减压蒸干(低于40C)然后加入3mL甲醇蒸干,重复以上操作4一5次，以完全除去TFA。 用超纯水溶解定容至100mL容量瓶，稀释100倍后上样测定。 凡军民.毛头鬼伞菌丝体多糖的分离、纯化和化学结构鉴定及生物活性研究[D].南京农业大学,2006. 方法2(山药多糖的分级纯化)取10mg多糖加入3mL2mol/L的TFA溶液，封管100C水解6小时减压抽干加入3mL酸性甲醇液减压抽干重复3次然后加入3mL甲醇液甲醇抽干，以充分带走TFA。 姜军.山药多糖的分离纯化及其化学结构的初步研究[D].扬州大学,2007. 方法3：(亚麻籽壳多糖的提取)称取多糖样品5mg于安甑管中，加入2mol/L三氟乙酸1.0mL在通有氮气的情况下用酒精喷灯封管，置于烘箱中120r水解3h再加入2.0mL甲醇，蒸干以完全去除三氟乙酸，反复3次,反应后置干燥皿中备用毛丰玮.亚麻籽壳多糖的提取、分离纯化与结构研究[D].浙江工商大学,2013. 方法4：(山药多糖的GC-MS分析)取10mg多糖加入3mL2mol/L的TFA溶液封管100C水解6小时减压抽干加入3mL酸性甲醇液，减压抽干重复3次加入3mL甲醇液，抽干，以充分带走TFA水解产物加入0.6mL0.05mol/LNaOH溶液，再加入5mgNaBH4，室温下反应8~10小时加少许乙酸分解过量的NaBH4，至无气泡产生为止，蒸干反应液，以酸性甲醇液洗涤反应产物，蒸干甲醇液，重复3次，以除去硼酸根最后加入甲醇蒸干并于105C烘箱中除去水分。 [1]姜军.山药多糖的分离纯化及其化学结构的初步研究[D].扬州大学,2007. 关键：TFA、甲醇的浓度、体积，蒸发次数当多糖含有糖醛酸时，由于中性糖和酸性糖对酸水解的耐受不同，与糖醛酸连接的单糖很难被酸水解。糖醛酸的定量可使用比色分析法或寻找需要其他的分析方法如GC-MS。含糖醛酸的多糖用氘代硼化钠还原后，再进行酸水解、衍生化，经GC-MS可以很好地定性糖醛酸类型。 测定衍生GC方法1：(山药多糖的GC-MS分析)乙酰化衍生物： 取水解的单糖3mg加入1mL的毗啶，1mL的乙酸酐，加热两个小时。 后减压抽干加入氯仿，溶解用蒸馏水洗涤，分三次萃取，取氯仿层，加压抽干，得棕黄色产物，此乙酰化的单糖醇用氯仿稀释后进行GC-MS分析。 GC-MS操作条件：DB-5MS柱(30mX0.25mmX0.25旦m)柱温采用程序升温开始温度为120°C，以10C/min速率升温至170C；再以15C/min升温至280C；最后在280C维持40分钟。MS条件：M/Z：50?550，电子流量70ev，EI源。 [1]姜军.山药多糖的分离纯化及其化学结构的初步研究[D].扬州大学,2007. 方法2：(亚麻籽壳多糖的提取)加入10mg盐酸羟胺0.5mL毗啶,摇匀于90°C条件下水浴反应30min加入1.OmL乙酸酐,90°C水浴30mm进行乙酰化反应氮吹去除溶剂，加入1.0mL肌醇六乙酸醋内标溶液，进行GC分析。 标准单糖的衍生化分别称取鼠李糖、木糖、岩藻糖、半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和葡萄糖标准品10口8,加入10mg盐酸羟胺，1mL毗啶摇匀,90°C水浴30min,加1mL乙酸酐,90°C水浴30min进行乙酰化,氮气吹干溶剂，加入1mL肌醇六乙酸酯内标溶液，进行GC分析。 气相色谱分析条件HP7890,FED检测器，色谱柱为HP-INNOWAX柱(30mxO.25mmxO.25um),恒流模式，流速为2mL/min,程序升温条件为：180°C保持1min,从180°C开始以5°C/min升温至210C,保持lOmin，再以1°C/min升温至230C,保持5min。进样口采用分流模式，分流比为10:1,进样口温度为270C。检测器温度为270C,检测器H2流速为30mL/min,空气流速为300mL/min，尾吹为25mL/min。进样量为1uL。 毛丰玮.亚麻籽壳多糖的提取、分离纯化与结构研究[D].浙江工商大学,2013. 方法3： 甲基化-气相色谱质谱联用分析(1)羧基还原10mg多糖溶于7mL水中，加入CMC330mg，磁力搅拌下滴加0.01mol/LHCl,使pH保持为4.75,维持2h。逐滴滴加2mol/LNaBD4溶液(10mL),此时pH值急剧上升，需用4mol/LHCL控制pH为7.00,持续搅拌,NaBD4溶液在45min内加完，在室温下继续反应Ih。反应完毕后，滴加冰乙酸至pH4.0以消耗多余的NaBD4,反应液蒸溜水透析24h,流水透析24h,透析袋内液浓缩后，冷冻干燥。 甲基化反应⑴无水