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差速离心与扒片方法涂片检菌效果观察 穿刺液是细菌检验中最常见的样品。只要检测到细菌的临床感染，这些样品就可以确定感染的类型。然而受各种因素的影响,无论是培养还是涂片检菌都还有较高的假阴性率。本文观察了各种涂片检菌的效果,收到很好的效果,现报道如下。 1 细菌学的常规培养 所有穿刺液标本均由临床送检。根据标本的不同性质做相应处理后进行细菌学的常规涂片和培养。常规涂片检菌阴性的以差速离心和甩片两种方法涂片检菌。 1.1 抗酸染色检菌 粘稠的脓性标本直接涂片三张,分别用于革兰染色检菌;抗酸染色检菌和备用。非粘稠的脓性标本5mL于负压采血管中,半径12cm离心机3500转/min,15min。弃上清,取混合后的沉淀物涂片同上。 1.2 采血管的吸血管后混血清学 粘稠的脓性标本约1mL于负压采血管中,注入0.9%无菌盐水4mL,混均。900转/min(离心加速度约110g),10min。用一次性吸管吸取上清到另一采血管中,3500转/min(离心加速度约1600g),15min,弃上清,混合沉淀物后涂片同前。非粘稠的脓性标本5mL于负压采血管中。900转/min,10min。用一次性吸管吸取上清到另一采血管中,3500转/min,15min,弃上清,混合沉淀物后涂片同前。 1.3 破片离心2. 粘稠的脓性标本约5uL与少量无菌盐水混合,加入洁净甩片装置中,放入特制甩片离心机(半径12cm)内500转/min,20min。染色检菌同前。非粘稠的标本3500转/min,15min。弃上清取混合均匀的沉淀物按上述方法涂片。 2 细胞形态检查 常规涂片检菌阴性的209例各类标本中,差速离心涂片检菌方法检出细菌70例;甩片法检出细菌11例。其中,75份脓性标本差速离心方法检出细菌49例;甩片方法涂片检出细菌3例。63份血细胞压积5%以上非粘稠穿刺液标本差速离心方法检出细菌15例;甩片方法涂片检出细菌5例。71份血细胞压积5%以下穿刺液标本差速离心方法检出细菌6例;甩片方法涂片检出细菌3例。两种涂片和培养检出细菌没有出现背离现象。 3 细胞检查和差速离心检查 降低细菌学检验的假阴性率是临床细菌学检验的主要任务。临床采集的各种穿刺液标本,通过细菌学检验去判断是否为细菌感染,有重要的诊断和治疗意义。受感染性质和抗菌药物广泛使用的影响,细菌学检验中的涂片检菌和培养都存在一定的假阴性率。由于穿刺液标本的特殊性,标本中找到细菌就可诊断有细菌感染。正因如此,人们对提高细菌的检出率作了不懈的努力。 近年来随着甩片技术的广泛应用于细胞学检查,细菌学检验借鉴了其方法,也取得了更高的细菌涂片检查的阳性率。然而,甩片技术只是为提高稀薄标本中组织细胞检出率设计。其根本目的就是使细胞成分浓集并沉淀在载玻片上,达到提高载玻片上单位面积内标本中有形成分的目的。由于甩片方法克服了常规离心涂片方法沉淀物受到残余上清稀释及沉淀物不能被全部涂片的影响,所以对于稀薄的标本此方法检菌也比常规离心方法有了更多的检出。从本次调查发现脓性标本采用甩片方法几乎没有意义。由于此类标本甩片后,单位面积载玻片上细菌并没有得到提高。要想达到提高单位面积载玻片上有形成分,唯一可行的就是增加涂片的厚度。然而提高厚度方法十分有限,略厚的涂片就会因大量的细胞成分无法染色和镜检。不能提高载玻片单位面积所包含的标本数量自然阳性检出率得不到提高。 差速离心在脓性标本检菌方面明显优于常规和甩片方法。主要原因就是通过低速离心使血细胞成分沉淀,而细菌更多的存留于上清中,此时上清再经高速离心则细菌就被高度浓缩到沉淀物中。此时的沉淀物涂片由于去除了绝大多数的血细胞,更多标本中的目的检出物被涂在单位面积载玻片上,故此获得了很好的效果也就不足为奇。 穿刺液差速离心涂片检菌方法也很适合标本量大的细菌检出,例如结核性胸水。此时患者常有大量血性积液,当血细胞成份多时,可先采用低速离心获取富含细菌上清,并将多个管中上清合并后在高速离心后涂片。如果沉淀中血细胞还太多时可用盐水悬浮后再次重复操作会极大提高结核菌的检出率。较稀薄的可先高速离心,将多个管中沉淀物合并后再通过差速离心同样会获得更高的检出率。总之,利用不同离心加速度血细胞和细菌沉降速度差别,灵活运用会很好的提高细菌的检出率。