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提高脓性穿刺液标本细菌涂片检查阳性率的方法 穿刺样品是细菌学检验中最重要的样品。无论是在涂料中寻找细菌，还是在细菌生长中培养细菌，对感染的诊断和诊断非常重要。因此, 降低涂片假阴性率对感染的诊断治疗意义重大。穿刺液涂片找菌是最常见的感染快速检验方法, 但临床实际工作中经常发现涂片找到G+球菌而培养却只有G-杆菌生长的现象, 故降低涂片检菌的假阴性率显得十分重要。笔者观察了差速离心技术和常规涂片方法进行穿刺液涂片找菌的效果, 现报道如下。 1 临床数据 1.1 样品 脓性穿刺液105例, 由临床以一次性注射器采集。稀薄的穿刺液不列入本资料。 1.2 方法 1.2.1 传统涂料 标本直接涂片到清洁的玻片上, 染色后镜检。 1.2.2 一般培训 标本20～50 μL接种于血液琼脂平板和中国兰琼脂平板, 35 ℃, 空气培养。 1.2.3 离心沉淀主效应 取一清洁无菌的负压采血管, 注入脓液标本约1 mL, 注入约6 mL输液用盐水, 混匀。500 r/min离心3～5 min, 吸取上清于另一试管中, 3 000 r/min离心15 min。沉淀物过多的重复以上操作。取沉淀物涂片, 染色后镜检。 2 不同菌株在表观上的菌株检菌情况 105例脓液常规涂片、差速离心处理后涂片和培养结果表观一致81例。其中65例为阳性一致, 16例为阴性一致。65例阳性表观一致中, 单一G+球菌43例, 单一G-杆菌15例, G+球菌和G-杆菌7例。表观不一致24例。差速离心处理后涂片检菌比常规涂片多检出15种细菌, 多数为G-杆菌。2种涂片只要找到G-杆菌培养都有G-杆菌生长。涂片找到G+球菌培养有13例无G+球菌生长。2种涂片都没有找到G-杆菌, 而培养有G-杆菌生长2例。 3 差速离心检菌方法的确定 脓性穿刺液标本涂片找细菌的阳性率与标本中单位体积内细菌数量关系密切。由于脓性标本常规方法无法浓集细菌, 涂片后大量血细胞成分占位及细胞碎片干扰辨别, 加之抗菌药物的使用细菌数量减少, 都增加了涂片检菌的假阴性率。临床上经常发现脓性标本涂片找到大量G+球菌, 培养却无G+球菌生长, 没有找到G-杆菌培养却有大量G-杆菌生长的现象, 说明涂片找细菌存在较多的假阴性。如果没有进行细菌培养检查, 临床就会忽略G-杆菌的治疗, 很可能导致G-杆菌成为真正的主要感染菌。 引起涂片检菌假阴性最主要原因是细菌单位体积内数量低, 一般来说细菌数量1×108L-1时, 涂片后每个油镜视野仅能见到一个细菌;涂片标本中细菌数量低于1×107L-1就很难被发现。本文针对脓性穿刺液标本的特点, 设计了差速离心检菌方法。其原理就是利用细菌和血细胞在较低离心加速度情况下沉降速率的差别, 使标本中大部分血细胞沉淀而细菌大部分没有沉淀, 细菌和血细胞分离, 再将含有少量细胞和丢失很少细菌的上清高速离心沉淀, 最终使沉淀物中细菌和血细胞比例有很大的提高。从结果看, 常规涂片找到细菌的, 差速离心检菌方法都没有漏检;且差速离心检菌比常规方法多检出细菌15例。只要证明多检出的细菌不是假阳性就说明此方法特别适合含有较多血细胞标本的细菌涂片检查。差速离心法比常规方法多检出细菌15例中G+球菌2例, G-杆菌13例。多检出的13例G-杆菌培养都有G-杆菌生长, 证明本方法结果可靠。多检出的2例G+球菌培养没有G+球菌生长。仔细观察24例不一致结果发现, 其他常规涂片14例找到G+球菌, 培养只有3例有G+球菌生长, 也从侧面说明多检出的2例G+球菌并不一定是假阴性。说明受各种因素影响, G+球菌培养极其容易出现假阴性。本文有1例涂片没有找到细菌的培养有G-杆菌生长, 笔者认为即使以差速离心法涂片检菌有假阴性也是不可避免的。但以差速离心方法处理含有大量血细胞的穿刺液标本, 能明显提高标本中细菌的涂片检出率。