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不同提取方法对正常小鼠胃肠运动的影响 第五磨饮子源于明代著名医生王三福的《医学大便》。它由木香、檀香山、槟榔、止痛药、五味中药组成。临床应用广泛。所有由肝脏和胃气量不调引起的胃痛、腹痛、腰痛、伤口等疾病都可以使用。愈合效果显著。本研究观察了不同剂量五磨饮子水提和醇提药液对正常小鼠胃肠运动的影响并探讨其部分作用机理, 报告如下。 1 实验材料 1.1 中药制备工艺 木香、沉香、槟榔、枳实、乌药:均购于云南鸿翔中草药有限公司;水提、醇提浸膏:均在云南中医学院中药化学实验室提取制备;莫沙必利:鲁南贝特制药有限公司, 批号:100802。 营养半固体糊制作:奶粉16g、葡萄糖8g、淀粉8g、活性碳末3g, 加入蒸馏水定容至300ml, 稍加热至该混合物变稠即可, 冷却后待用。 1.2 云南省云南省scxk- SPF级KM种小鼠, 雌雄各半, 体重18～22g, 购自昆明医科大学, 合格证号:SCXK (滇) 2011-0004。实验前动物先适应性饲养3天, 给予标准普通饲料和充足的饮用水, 自由饮食, 实验前禁食24小时。 2 实验方法 2.1 生药浓度的受试药物 80只小鼠, 随机分为8组, 分组及给药见表1, 各组分别灌胃给予不同生药浓度的受试药物。给药30分钟后各鼠均灌服黑色半固体糊0.5ml/只, 详细记录每只小鼠灌糊时间, 给药后各鼠分别置于铺有滤纸的透明烧杯内, 观察小鼠排便情况, 准确记录排出第一粒黑便时间, 计算小鼠消化时间。 2.2 胃内残留率% 实验分组和给药剂量见表1。给药30分钟后各鼠均灌服黑色半固体糊0.5ml/只, 15分钟后颈椎脱臼处死小鼠, 剖腹, 迅速结扎贲门及幽门, 自贲门部至回盲部将胃及小肠一并取出, 再剪断幽门部, 将胃和小肠分离开, 用滤纸轻擦胃体表面称其全重, 然后沿胃大弯剪开胃体, 洗去胃内容物再用滤纸擦干水分称胃净重。以胃全重和胃净重之差为胃内残留物重量, 计算胃内残留物占所灌服半固体糊重量的百分比为胃内残留率。胃内残留率 (%) =胃内残留物/所灌半固体糊×100%。同时, 迅速取出小肠 (幽门至回盲部) , 轻轻分离相连的肠系膜后直铺于盛有少量生理盐水的托盘中, 用直尺测量小肠全长及幽门至黑色半固体糊前沿的距离。以幽门至黑色半固体糊前沿的距离占小肠全长的百分比为小肠推进率。炭末推进百分率 (%) =炭末到推进前沿的移动距离/小肠总长×100%。 2.3 连续给药及剂量 实验前各小鼠准确记录体重, 分组及给药量同上。每天给药1次, 连续给药7天, 给药后小鼠自由饮食。末次给药后禁食8小时, 检测小鼠体重, 计算小鼠体重增加值。 2.4 小鼠血清学检测 取小鼠50只, 随机分为5组, 分组情况见表3, 给药剂量同上。每天给药1次, 连续给药7天, 给药期间小鼠自由饮食。末次给药后禁食4小时, 摘眼球取血, 肝素抗凝试管中摇匀, 4℃低温高速离心15分钟 (2000r/min) , 取上层血浆, 于-20℃冰箱冻存, 检测前速融。放免法检测血浆中胃动素 (MTL) 与血管活性肠肽 (VIP) 含量, 试剂盒购自北京华英生物技术研究所, 按试剂盒说明操作。 2.5 标准差分析 计量资料数据以均数(xˉ)±(xˉ)±标准差 (s) 表示, 数据符合正态分布、方差齐的数据进行方差分析;计量资料不符合正态分布, 则用秩和检验。 3 结果 3.1 各组大鼠的屠宰时间、胃内残留率和加强率的比较 结果见表1。 3.2 各组大鼠体重增长情况 见表2。 3.3 各组均测定了大鼠血浆输入和血管活性肠蛋白的含量 结果见表3。 4 药物致小鼠体重的影响 五磨饮子方中木香行气止痛, 入脾、胃、大肠、胆、三焦经, 用于脾胃气滞等证;槟榔辛温降泄、破积下气, 既破三焦气滞, 又可导气下行;乌药辛温香窜, 行气止痛、温肾散寒, 用于寒凝气滞所致的胸腹诸痛证;沉香行气止痛、温中止呕, 用于胸腹胀痛, 胃寒呕吐等证;枳实破气除痞、化痰消积, 用于食积、胃肠热结气滞证。全方配伍, 共奏行气降逆、宽胸散结之功。 本实验选用的对照药物莫沙必利为选择性5-羟色胺4 (5-HT4) 受体激动药, 能促进乙酰胆碱的释放, 刺激胃肠道而发挥促动力作用, 从而改善功能性消化不良患者的胃肠道症状。本实验中, 莫沙必利对增强胃肠蠕动、促进胃排空、降低小鼠胃内残留率、促进小肠推进有明显作用, 连续给药7天对小鼠体重增长没有明显的影响, 能明显降低血浆VIP、升高血浆MTL。 本实验结果发现五磨饮子水提和醇提药液均能明显促进小鼠胃肠运动, 表现为: (1) 缩短正常小鼠消化时间:水提剂随着剂量的增加, 缩短小鼠消化时间效果更加明显;醇提剂在低剂量时效果不显著, 但达到一定浓度后, 作用效果却十分明显。 (2) 增强小鼠胃肠蠕动, 促进胃排空和小肠