第十三章基因药物分析.pptVIP

3. 酶促反应的条件及影响因素： 使所有待测定的酶分子都应该能够正常地发挥它的作用。 ★如何选择酶促反应的条件： ? 底物浓度影响：反应速率受到底物浓度影响 ? pH影响：pH影响酶的活性和反应方向 [S]＝100Km pH7 pH10 乳酸 丙酮酸 如：乳酸脱氢酶 第二十九页，共四十七页，2022年，8月28日 ? 温度影响： 这一影响体现在两个方面 直接影响化学反应速度 影响酶 通常选用25℃，30℃或37 ℃（±0.1℃） ? 辅助因子影响： 有些酶需要金属离子，有些酶则需要相应的辅酶物质。为了提高酶在反应系统中的稳定性，有时需要某些相应的物质。如对巯基酶可加入二巯基乙醇、二巯基苏糖醇等。 第三十页，共四十七页，2022年，8月28日 ? 空白和对照： 通过不加酶，或不加底物，或二者都加（但酶需经过失效处理）； 空白是指杂质反应和自发反应引起的变化量； 提供未知因素的影响。 对照是指用纯酶或标准酶制剂测得的结果，主要用于比较或标定。 第三十一页，共四十七页，2022年，8月28日 ii) 常用方法有： 适当条件下 将酶和底物混合 ① 测定生成一定量产物所需的时间，即终点法 ② 隔一定时间，间断或连续地测定反应变化 ③ 反应一定时间后停止反应，定量测定底物减少或产物生成的量 i) 包括物理法、化学法和酶分析法 4. 测定方法： 第三十二页，共四十七页，2022年，8月28日 按取样和检测方式分为取样测定和连续测定： ★ 取样测定 酶反应开始后不同的时间，取出一定量反应液，并用适当的方法停止其反应后，对产物和底物进行定量分析，求得单位时间内酶促反应变化量的方法。 加入酶变性剂 加热使酶变性 第三十三页，共四十七页，2022年，8月28日 第一页，共四十七页，2022年，8月28日 第一节 概 述 什么是生物药物 利用生物体、生物组织或器官等成分，综合运用生物学、生物化学、微生物学、免疫学、物理化学合药学的原理与方法制得的药物。 广义的生物药物包括各种天然生物活性物质以及人工合成或半合成的天然物质类似物。 第二页，共四十七页，2022年，8月28日 生化药物 Biochemical drugs 生物技术药物 Bio-technology drugs 生物制品 Biological products 生物提取物 生物-化学半合成现代生物技术 什么是生化药物和基因工程药物？ 生物药物 生命基本物质及其衍生物、降解物、结构修饰物等 运用生物技术进行新药研发 如基因工程药物 生物技术 生物材料制备 第三页，共四十七页，2022年，8月28日 什么是基因工程药物（Genetic engineering drugs）？ 功能蛋白 预防、治疗某种疾病 调控基因的分离、纯化或人工合成 控制蛋白合成 DNA重组技术 可大量生产的受体细胞 导入 细菌、酵母菌、动植物及其细胞 基因的繁殖表达 发 现 第四页，共四十七页，2022年，8月28日 生化药物和基因工程药物的种类 生化药物 基因工程药物 氨基酸、多肽、蛋白质 酶类与辅酶类 多糖类 脂质类 核酸及其降解物、衍生物 主要成分为多肽或蛋白质 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶类及凝血因子类 … 第五页，共四十七页，2022年，8月28日 生化药物和基因工程药物的特点 来源均为生物体，并都具一定的生物活性和生物功能； 治疗疾病的针对性强、毒副作用小、易为人体吸收； 分子量大，且往往不是定值； 结构确证难； 质量对多种因素敏感，需进行全程质量控制； 需进行生物活性检查、安全性检查、效价检查等； 第六页，共四十七页，2022年，8月28日 第二节 质量检验的基本程序与方法 理化鉴别法 生化鉴别法 生物鉴别法 化学鉴别法 UV光谱法 HPLC法 显色、沉淀等 肽图谱 酶法 电泳法 脱盐后等电聚焦法 利用酶的专属性 利用带电荷差异 利用等电点差异 利用生物体进行试验来鉴别药物 1.鉴别 第七页，共四十七页，2022年，8月28日 2. 杂质检查 一般杂质检查： 原料药的检查 同化学药物 多糖类：检查低聚糖、核酸、蛋白质等； 特殊杂质检查： 酶类：酶催化反应基本产物分析，相关酶 的检查； （生化药物） 第八页，共四十七页，2022年，8月28日 基因工程药物的生产涉及到生物材料和生物学过程，因此可能会存在很多传统生产方法不可能存在的有害杂质。 生产过程中杂质的检查（尤其是基因工程药物） 基因工程药物质量控制必须结合最终产品、有效的中间测试以及有效的方法来去除可能的杂质。 如：原核细胞中表达的产品可能含有内毒素、致敏原 如：动物细胞中表达的产品可能含有DNA杂质或病毒 第九页，共四十七页，2022年，8月2