乳杆菌的biolog微生物自动分析.docx

乳杆菌的biolog微生物自动分析 干旱乳菌、类干酪菌和鼠李糖蜜菌属于杆菌属，是一种常见的致病性。随着分类技术的发展，这种类型的分类地位发生了变化。 随着仪器分析技术的进步和计算机的广泛应用,微生物菌种鉴定已进入基于仪器自动化分析阶段。Biolog微生物自动分析系统是近20年才推出的商品化微生物自动鉴定系统,该系统主要是根据细菌对95种碳源的利用情况及其数据库内信息,经计算机分析比较,实现对待测菌的鉴定,已成为国际上细菌分类鉴定的常用技术手段。本实验采用Biolog微生物自动分析系统对已知干酪乳杆菌、类干酪乳杆菌类干酪亚种及鼠李糖乳杆菌进行复核鉴定,分析该系统在这3种乳杆菌鉴定中的应用效果。 1 材料和方法 1.1 类干酪乳杆菌种及发酵性能 供试乳杆菌菌株为干酪乳杆菌ATCC 393T、ATCC 15008、JCM 8129,类干酪乳杆菌类干酪亚种JCM 1053、JCM 1111,鼠李糖乳杆菌NBRC 3425T、ATCC 8530、ATCC 10863、ATCC 11981、ATCC 53103。 1.2 tween-80s,kh2o-mnso-4h2o-mnso-3h3o-msnso-4h2o,添加3.2g/lm-3,5.2.3 蛋白胨10 g,葡萄糖20 g,酵母浸膏5 g,乙酸钠5 g,柠檬酸氢二铵2 g,牛肉膏10 g,Tween-80 1 mL,K2HPO42 g,MnSO4·4H2O 0.25 g,蒸馏水1 000 mL,pH 7.2。 1.3 ph值的确定 按制备1 000 mL培养基计,称取51.7 gBUA培养基,950 mL纯净水、蒸馏水或去离子水置于容器中,轻微煮沸,搅拌以溶解琼脂和其它组份;冷却后调整pH值至7.2±0.1(25 ℃);121 ℃灭菌15 min;冷却至45～50 ℃,加50 mL新鲜的脱纤羊血,摇匀,倒平板。 1.4 厌氧系统设置 Biolog微生物自动分析系统(Biolog读数仪和4.2版Biolog Microstation系统),浊度计,8头电动移液器,厌氧手套箱,超净工作台,恒温培养箱,厌氧培养罐,厌氧菌鉴定微平板,厌氧菌浊度标准管,厌氧菌接种液试管等。 1.5 厌氧菌接种液培养 在厌氧手套箱中,从供试乳杆菌菌株,在MRS液体培养基中活化两代,然后在BUA+B平板上划线,37 ℃厌氧条件下培养48 h。 在超净工作台中,使用无菌棉签从在BUA+B平板表面蘸取菌体,转入厌氧菌接种液试管内,翻转厌氧菌接种液试管,令菌体扩散到厌氧菌接种液中,并插入浊度计读数,若读数(67±1)%,则继续加入菌体,若读数(67±1)%,则加入厌氧菌接种液,直至浊度计读数达到(67±1)%。 在超净工作台中,打开厌氧菌鉴定微平板上盖,用8头电动移液器将制备好的菌悬液接种到厌氧菌鉴定微平板的各孔内,每孔100 μL,共96孔,然后盖上盖子,并在有氧条件下静置10～15 min,再放入厌氧环境中37 ℃培养。 厌氧培养20～24 h后,取出厌氧菌鉴定微平板,放入Biolog读数仪中读取数据。 1.6 id光鉴定结果的组成 Biolog微生物自动分析系统的鉴定结果由ID box(系统默认鉴定结果)、ID List(系统根据最相近原则给出的参考鉴定结果) 和MicroPlate reactions(被鉴定菌株的碳源利用情况)3部分组成,ID List中各鉴定结果(ID)均对应可能性Probability (PROB)、相似性Similarity (SIM)和位距Distance (DIST) 3个重要参数。 2 结果与分析 2.1 最佳鉴定结果 10株供试乳杆菌菌株ID1和ID2的主要特性参数列于表1中。系统默认PROB值最高的ID1为最佳鉴定结果,供试乳杆菌菌株系统默认鉴定结果列于表2中。 按照Biolog微生物自动分析系统规定,4.2版Biolog Microstation系统默认PROB值最高的ID1为最佳鉴定结果;当SIM等于1.00,或者SIM值0.5,且ID1与ID2的DIST值相差2.0以上时,ID1准确可信,采纳系统默认鉴定结果;当ID1的SIM值接近0.5,或者ID1与ID2的DIST值相差不到2.0时,不采纳系统默认鉴定结果,ID1和ID2均作为参考结果。 根据表1和表2可知:菌株ATCC393T、JCM8129、JCM1053、NBRC3425T、ATCC8530、ATCC10863、ATCC11981可参考结果中ID均准确可信,且Biolog系统默认鉴定结果与菌株原名称相符;菌株ATCC15008、JCM1111、ATCC53103 △DIST2.0,不能准确鉴定到种,ID1和ID2均作为参考结果,且Biolog系统默认鉴定结果与菌株原名称不相符。 2.2 -甲基-d-葡萄糖苷对大