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人白细胞介素1a（IL-1a）酶联免疫检测 试剂盒使用说明书 使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于双抗体夹心技术原理，来检测人白细胞介素1a（IL-1a），只能用于研究用途，不得用于医学诊断。 用途：用于人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素1a（IL-1a）的测定。 工作原理 本试剂盒采用的是双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人白细胞介素1a（IL-1a）的水平。向预先包被了人白细胞介素1a（IL-1a）单克隆抗体的酶标孔中加入白细胞介素1a（IL-1a），温育；洗涤后，加入HRP标记过的白细胞介素1a（IL-1a）抗体。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物A、B，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人白细胞介素1a（IL-1a）的浓度呈正相关。 试剂盒组成 1 标准品（80ng/L） 0.5ml 7 显色剂A液 6ml 2 标准品稀释液 3ml 8 显色剂B液 6ml 3 酶标包被板 12孔X8条 9 终止液 6ml 4 酶标试剂 6ml 10 说明书 1份 5 30倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2张 6 样品稀释液 6ml 12 密封袋 1个 需要而未提供的试剂和器材37°C恒温箱。 标准规格酶标仪。 精密移液器及一次性吸头蒸馏水，一次性试管吸水纸注意事项从2-8C取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少30分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差建议所有标准品、样本都做双份检测。如标本中待测物质含量过高，请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再按说明书操作进行测定，计算时请最后乘以总稀释倍数 （XnX5）。 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。 洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少0.35ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中标本要求 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融操作程序1.标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）： 40ng/L （5号标准品） 120^1的原倍标准品加入120p1的标准品稀释液 20ng/L （4号标准品） 120^1的5号标准品加入120^1的标准品稀释液 10ng/L （3号标准品） 120^1的4号标准品加入120^1的标准品稀释液 5ng/L （2号标准品） 120^1的3号标准品加入120^1的标准品稀释液 2.5ng/L （1号标准品） 120^1的2号标准品加入120^1的标准品稀释液 分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入稀释好的标准品50叶在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40叽然后再加待测样品10pl（样品最终稀释度为5倍）。轻轻晃动混匀，37C温育30分钟。 弃去液体，甩十，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍十。 每孔加入酶标试剂50叽空白孔除外。轻轻晃动混匀，37C温育30分钟。 弃去液体，甩十，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍十。 每孔先加入显色剂A50P1，再加入显色剂B50P1，轻轻震荡混匀，37C避光显色10分钟. 取出酶标板，每孔加终止液50叽终止反应（此时蓝色立转黄色）。 测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。 根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 检测范围：1.5ng/L—50ng/L。 规格：96T/盒保存：2-8r有效期：6个月（2-8°C）。