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你不知道的AAV动物实验注射攻略
在进行疾病治疗时,都需要将药物通过不同的方法递送到人体内才能发挥作用,药物进入人体通常有如下方法:
?口服;
?通过注射方法如静脉注射,肌肉注射,鞘内注射,皮下注射;
?舌下(舌下)或牙龈和面颊(口腔)之间;
?插入直肠(直肠)或阴道(阴道);
?放置在眼睛(通过眼睛路线)或耳朵(通过耳朵路线);
?喷入鼻腔并通过鼻膜吸收(鼻腔);
?通过口腔(吸入)或口鼻(通过雾化)呼吸到肺部;
?施用于皮肤以获得局部或全身效果;
?通过贴片(透皮)经皮肤递送以产生全身效果而在我们日常的科学实验研究中,往往都需要使用吉凯基因提供的慢病毒,腺相关病毒等工具注射到动物体内研究动物机体功能及代谢路径等,以观察阐明疾病发生发展机制。而这时就需要选择一定的注射方式,今天小编尽可能的罗列出动物实验中各种不同给药途径的方法步骤,供大家参考。
1、尾静脉注射(1)首先,提取小鼠尾巴,将其放在鼠笼盖或者手背上,并进行适当的安抚;(2)然后,将小鼠装入固定器中,盖紧盖子,并使尾巴朝外露出用酒精棉球擦拭小鼠尾巴或者用热水、浴霸加热,使其血管扩张;(3)将尾巴拉直,使其红色静脉清晰可见;(4)距离鼠尾尖1/3处进针,若进针畅通无阻,则说明针头在血管内;(5)检查针管内有无回血,如有,则可以注射;(6)用棉球按压注射点1min左右进行止血;(7)最后,将小鼠从固定器取下,放回鼠笼中。
补充说明:
大鼠尾静脉注射病毒量参考:文章“AAV9supportswide-scaletransductionoftheCNSandTDP-43diseasemodelinginadultrats”中给出:6周龄的年轻成年大鼠重约150g。文中AAV9TDP-43orAAV9GFP,一个典型的剂量是每kg大鼠给药3x1013-1x1014v.g。确保体积不超过标准建议注射量体积(250克大鼠250-500皿)。对于年轻的成年大鼠,推荐的注射体积是200pl。
(2)小鼠尾静脉注射视频手机登陆淘基因官网进入资讯“动物注射”板块观看。
2、颞/面静脉注射
(1)将一只幼崽直接放在湿冰上30-60秒,以麻醉动物。由于存在低温相关并发症(包括心室颤动,组织缺氧和代谢性酸中毒)的风险,请勿将动物置于冰上太久。文章中告知,30-60秒足以减缓小鼠运动以允许注射。如果需要更深的麻醉,吸入剂如1-2%的异氟烷可能是合适的。
(2)当动物在冰上时,向注射器中加入30叩伊文思蓝染料。
(3)当动物完全麻醉时(仍然呼吸但在冰上缺乏运动),在显微镜下移动它。对于右手注射,请将对着动物的枪口朝向右侧,将左手食指放在枪口上,左手中指放在耳塞尾部,使耳塞位于食指和中指之间。
(4)检查耳朵前方的毛细血管,当皮肤被操纵时会移动。毛细管并不是目标,而是识别颞/面静脉识别很重要。接下来,找到毛细管下方的暗阴影静脉,无论皮肤位置如何,毛细管都保持固定。颞静脉呈阴影状,向腹侧背侧,并进入颈静脉。
(5)进入颞静脉,针斜面向上。如果正确插入,可以通过皮肤观察针斜角填充血液。然后慢慢压下柱塞,注意静脉沿着脸部侧面漂白(5)让针头在静脉内保持10-15秒,以防止注射剂回流。
图A:临时注射平台;图B:手指位置;图C:注射位点
说明:更多注意事项请阅读文章“IntravenousInjectionsinNeonatalMice”。
3、腹腔注射(1)首先,从笼中提取小鼠尾巴,并将其放在手背上,进行适当安抚。
(2)然后,左手握小鼠,用拇指、食指捏住小鼠颈背部,用无名指及小指固定其尾和后肢,腹部向上,头呈低位。
(3)右手持注射器,插入小鼠腹部,注射部位为下腹部离腹白线约0.5cm处,使针头与小鼠腹部约成30角刺入腹腔,针头刺入的速度要快,刚开始刺时会有一种明显的抵抗力,那是因为鼠皮具有韧性,后来突然会有一种抵抗力消失的感觉,说明针头已刺入腹腔内,此时回抽没有回血,说明针头没有进入脏器,就可以进行注射。(注意:针头刺入腹腔不宜超过1cm,进针动作要轻柔,防止刺伤腹部器官)(4)注射完病毒后,缓缓拔出针头,并轻微旋转针头,防止漏液。
(5)最后,将小鼠重新放回笼中,继续饲养观察。
4、视网膜下注射通过腹腔注射安乐死和唑拉西泮(1:1,2.25mg/kg体重)和盐酸甲苯噻嗪(0.7mg/kg体重)或替代品的混合物麻醉成年小鼠(即6-8周龄);用0.5%的去氧肾上腺素和0.5%的托毗卡胺滴眼液扩张瞳孔;准备已经加有1.5-2叩病毒微量注射器;为了方便注射,打开眼睑,使眼睛露出赤道(equator),并在手术显微镜下观察。保持眼睛露出赤道(equator)直到注射结束,防止在注射期间可能发生针的移位。将手指方攵在眼眶边缘外以便牢牢握住眼球;在角膜表面涂抹一滴眼用粘弹性溶液;在角膜顶部放置一个小圆形盖玻片,以
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