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成乳牛群瘤胃内挥发性脂肪酸的测定 真胃变位是奶牛临床疾病之一。据统计, 成乳牛群的年发病率在1.6%～2.3%, 绝大多数病例未能确诊或确诊后未能进行及时有效的治疗而淘汰, 造成很大的经济损失。在发病机制上, 目前尚无一致性结论。国外兽医工作者对遗传、气候、营养、疾病等因素在真胃变位发生率上的作用进行了调查和统计, 并在血液电解质变化、酸碱平衡失调、瘤胃和真胃内环境变化、肝功能评定等方面进行了深入的研究。本研究目的为以手术致左方变位山羊为研究对象, 定期采集实验动物瘤胃液, 测定内容物挥发性脂肪酸 (VFA) 含量及组成比例, 并与对照组相对比, 探明真胃左方变位后瘤胃内容物VFA含量及组成比例的变化规律, 为该病的诊断与治疗以及奶牛科学的饲养管理提供理论依据。 1 材料和方法 1.1 真胃左方液压结节变位组的手术方法 利用9只健康山羊平均分为3组进行手术, 分别为真胃左方髋结节变位组、真胃左方腹底壁变位组和对照组。真胃左方髋结节变位组即通过手术将真胃绕过瘤胃底壁牵至瘤胃左侧髋结节处, 并进行固定。真胃左方腹底壁变位组即通过手术将真胃牵至腹底壁, 并进行固定。对照组不改变真胃位置, 只进行腹壁的切开与缝合。3组动物分别行瘤胃插管, 以进行胃内容物取样, 进行胃内容指标测定。 1.2 样品采集和保存方法 定期分别通过瘤胃插管采集瘤胃液, 采集后立即用4层纱布过滤。样品装于塑料瓶内, 于-20℃冰箱内冷冻保存, 待测。 1.3 气相色谱法 分别取瘤胃液5 mL, 离心15min, 转速为15 000 r/min, 得上清液, 取上清液1 mL, 加20% (含60 mmol/L土豆酸) 偏磷酸0.2 mL, 混匀高速离心, 12 000 r/min离心15 min, 得上清液。取上清液0.4 μL, 采用日本岛津GC-9A气相色谱仪测定。色谱条件:毛细管柱CP-WAX (长30 m, 内径0.53 mm, 膜厚1 μm) ;气化室温度200℃;FID监测器温度200℃;柱温采用程序升温法, 初温100℃, 末温150℃, 升温速率3℃/min, 灵敏度为101, 衰减为25, 进样量0.4 μL。 1.4 数据计数方法 数据的统计处理用SPSS10.0进行。 2 结果与分析 2.1 真胃变位对瘤胃vfa的影响 瘤胃中碳水化合物发酵的主要终产物是乙酸、丙酸和丁酸等VFA, 其含量是反映瘤胃消化代谢活动的重要指标。变位手术后最初3 d瘤胃VFA总量与对照组相比呈下降趋势, 这是发酵物质减少引起的, 可能与手术应激反应而致的采食量下降有关。在手术稳定期 (术后4～8 d) 瘤胃VFA含量仍低于对照组表明由于真胃变位瘤胃的消化代谢受到了影响, 导致了瘤胃微生物发酵能力降低, 其中以真胃左方髋结节变位影响最大、腹底壁变位次之, 差异极显著 (P0.01) 。真胃变位后第8～12天, 对照组瘤胃VFA表现平稳, 但真胃变位组均表现出瘤胃VFA浓度呈上升趋势, 最后高于对照组, 并在临床症状表现出了瘤胃臌气, 这可能是瘤胃内容排出不畅引起的, 但测定结果表现出真胃髋结节变位组瘤胃VFA浓度小于腹底壁变位组, 差异极显著 (P0.01) , 这可能与真胃髋结节变位组采食量显著减少有关。Gregory和朱祖康分别证实瘤胃灌注VFA可明显地抑制瘤胃运动, 因此结合本试验认为, 真胃变位将使瘤胃运动弛缓。真胃变位13 d后, 真胃变位组瘤胃VFA均呈下降趋势, 说明随着真胃变位病程的延长, 机体受到严重影响, 瘤胃微生物发酵能力明显降低。 纵观真胃变位后瘤胃VFA浓度的动态变化, 特别是真胃左方髋结节变位组, VFA浓度呈现出复杂的变化, 有很多拐点, 具有一定的非规律性, 这可能与多种因素的影响有关, 还需进一步研究。 2.2 真胃变位对瘤胃微生物群的影响 瘤胃VFA组成比例是评述瘤胃发酵方式和发酵能力的直接指标。卢德勋研究表明乙酸与丙酸比例降低, 会影响纤维物质在瘤胃内发酵与降解。人工真胃变位手术6 d后, 变位组均出现乙酸与丙酸比例升高, 表明乙酸产量增加, 丙酸相对减少, 表明发酵过程中瘤胃生成VFA的微生物类群数量或者代谢能力降低。而乙酸与丙酸比例表现为真胃左方髋结节变位组大于真胃腹底壁变位组, 差异极显著 (P0.01) , 说明瘤胃微生物类群所受影响与真胃变位程度有关, 即真胃左方髋结节变位组大于真胃腹底壁变位组。人工真胃变位12 d后, 真胃变位组表现出乙酸的产生呈降低趋势。人工真胃变位12 d后, 真胃变位组均未表现出乙酸与丙酸比例下降, 进一步说明随着真胃变位病程的延长, 瘤胃微生物类群所受影响会进一步加剧, 瘤胃发酵类型发生了显著改变。 李胜利等与Grummer (1993、1995) 的研究均表明VFA对胰岛素有影响, 即丙酸