23个柑橘品种果实油胞层类黄酮组分鉴定与抗氧化活性研究.docx

? ? 23个柑橘品种果实油胞层类黄酮组分鉴定与抗氧化活性研究 ? ? 刘阳，臧文静，梁潇，王岳，李鲜，孙崇德 （浙江大学果实品质生物学实验室/农业农村部园艺植物生长发育与品质调控重点开放实验室/园艺产品冷链物流工艺与装备国家地方联合工程实验室/园艺植物整合生物学研究与应用浙江省重点实验室 杭州 310058） 柑橘是世界大宗水果，具有重要的国民经济价值。我国幅员辽阔，有适宜柑橘栽培的多种气候和土地类型，为多种柑橘资源的积聚提供了良好条件。目前我国柑橘种植面积和产量均居世界首位，种植面积在2019 年达2 617 000 hm2，产量为4 584.54 万t[1]。 我国浙-闽-粤柑橘带作为传统柑橘产区，主要种植宽皮橘、柚、杂柑；长江中、上游柑橘带，即湖北、四川、重庆地区主要种植甜橙；赣南-湘南-桂北柑橘带主要种植甜橙及宽皮橘；鄂西-湘西柑橘带主要种植温州蜜柑和椪柑[2]。我国柑橘栽培品种丰富，利用价值多样，为食品和保健领域更高效、更全面利用柑橘资源提供了优势。 柑橘果实富含多种药用价值的生物活性物质，包括类黄酮、酚酸、萜类化合物、类胡萝卜素、生物碱、精油、果胶、膳食纤维以及VC 等[3]。随着这些功能组分的生物活性和药理作用机制的明晰，对柑橘生物活性物质的研究受到重视，其中类黄酮作为重要的一类活性物质，在不同种类柑橘果实中的研究中均有涉及[4]。类黄酮是指一类具有2-苯基色原酮（C6-C3-C6）为基本骨架的天然酚类化合物（图1），其结构中含有酚羟基、甲基、甲氧基等取代基团。目前柑橘属中发现的类黄酮多以苷的形式存在，主要为黄烷酮、黄酮和黄酮醇[5]。其中，含有4 个及以上甲氧基取代基的类黄酮称为多甲氧基黄酮（Polymethoxyflavonoids，PMFs），主要分布在柑橘果皮油胞层中[6]，因其富含较多的甲氧基团，亲脂性较高，故与一般黄酮相比具有更高的生物利用度，也具有更强的生物活性[7]。 图1 类黄酮基本结构Fig.1 General structure of flavonoids 类黄酮含量与类型在不同柑橘品种中的差异被大量研究所证实，例如，柚类中主要的类黄酮为柚皮苷、柚皮芸香苷、圣草枸橼苷、新橙皮苷和柚皮素[8]。柠檬中橙皮苷与圣草次苷含量较高[9]。宽皮橘果皮中PMFs 含量较高[10]。对我国特有的13 种柑橘属植物果实进行类黄酮含量分析发现，在柚类、橙类、宽皮橘类中，柚类果实的柚皮苷含量最高，宽皮橘类和橙类的橙皮苷含量最高[11]。柑橘果实不同组织部位中类黄酮的种类和含量也有较大差异。研究发现，将“瓯柑”和“胡柚”果实分为油胞层、白皮层、囊衣和汁胞4 个部分，测定类黄酮种类和含量，结果油胞层中富含PMFs，而白皮层中黄烷酮含量较高[4]。 现代流行病学研究表明，柑橘果实中丰富的类黄酮具有抗氧化[12]、抗肿瘤[13]、降血脂[14]和抗炎症[15]等作用。机体的氧化现象主要是因为存在自由基，自由基具有强氧化能力，在机体内与功能重要的生物大分子反应，使之丧失活性，逐渐引起细胞、机体功能障碍，对机体造成损伤、病变。而类黄酮自身结构赋予独特的理化性质，具有良好的抗氧化活性。类黄酮结构中的羟基不仅具有较强的自由基清除能力[16]，还与金属离子螯合，减少自由基的产生，达到抗氧化效果[17]。类黄酮也可通过抑制氧化酶活性和促进抗氧化酶活性来抵抗机体氧化损伤[18]。有关柑橘类黄酮抗氧化活性已有很多研究报道，例如，“瓯柑”和“胡柚”4 个部位粗提物均有一定的抗氧化活性，其中，油胞层具有最强的DPPH 自由基清除活性[4]。 目前，柑橘果实类黄酮的鉴定方法主要有色谱法、分子质谱法、核磁共振法、紫外-可见光吸收光谱法等。在柑橘类黄酮鉴定方面，色谱法应用较广泛，紫外-可见吸收光谱法应用相对较少。以往关于柑橘果实中类黄酮的研究，特别是不同柑橘品种果实中类黄酮的种类、含量及相关活性评价等，大多利用HPLC 通过比对标准品对已知结构类黄酮进行分析，而利用高分辨质谱等技术鉴别不同种类柑橘果实中的类黄酮研究较少。 本文以23 个品种的柑橘为材料，比较柑橘果实的品质。采用超高效液相色谱、高效液相色谱-高分辨质谱联用等多种技术，对柑橘果实油胞层中的类黄酮进行鉴定和抗氧化评价。从组分和活性角度挖掘柑橘组分和抗氧化活性信息，为其活性研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料、试剂与仪器设备 试验材料：23 个柑橘品种如图2 所示，于2017—2018 年果实商业采收期采集，挑选大小、色泽均匀，无机械伤、无病虫害的单果为试验材料。取果实油胞部分，用液氮处理后冷冻干燥至恒重，干样磨成粉末储存于-40 ℃条件下，备用。 图2 本试验用不同品种柑橘果实Fig.2 Different citrus varieties used in the