动物肝脏中DNA的提取和检测实验报告.docxVIP

动物肝脏中DNA的提取及检测 -、前言 脱氧核植酸 脱氧核植醪（DNA，为英文Deoxyribonucleicacid的缩写），又称去氧核核醪，是脱氧核植醪染色体的主要化学成分，同时也是组成基因的材。有时也被称为“遗传微，原因是在繁殖过程中，父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中，从而完成性状的传播。 DNA是高分子聚合物，DNA溶液为高分子溶液，具有很高的粘，可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线（260nm）有吸收作用，用这-特性，可以对DNA进含测定。当核醪变性时，吸光升高，称为增色效应；当变性核醪重新复性时，吸光又会恢复到原来的水平。较高温、有机溶剂、醪碱试剂、素、酰胺等可以引起DNA分子变性，即DNA双链碱基间的氢键断，双旋结构解开一也称为DNA的解方旋。 在细胞内，DNA能与蛋白质结合形成染色体，整组染色体则统称为染色体组。对于人类而言，正常的体细中含有46条染色体。染色体在细胞分之前会先在分间期完成复制，细胞分间期又可划分为：G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于真核生物，如动物、植物及真菌而言，染色体主要存在于细胞核内；而对于原核生物，如细菌而言，则主要存在于细胞节中的拟核内。染色体上的染色节蛋白，如组织蛋白，能够将DNA进组织并压缩，以帮助DNA与其他蛋白节进交互作用，进而调节基因的转录。 脱氧核核酸的结构 DNA的结杓：DNA的给杓-般可划分为-级结杓、二级结杓、三级结杓和四级结杓四个水平。 DNA是一种长链聚合物，组成单位为四种脱氧核苷醪，即腺嘌呤脱氧核苷醪（dAMP脱氧腺苷）、胸腺嘧啶脱氧核苷醪（dTMP脱氧胸苷）、胞嘧啶脱氧核苷醪（dCMP脱氧胞苷）、鸟嘌呤脱氧核苷醪（dGMP脱氧鸟苷）。而脱氧核（五碳）与磷醪分子借由酯键相连，组成其长等骨架，排在外侧，四种碱基排在内侧。每个分子与四种碱基的其中-种相连，这些碱基沿着DNA长等所排而成的序，可组成遗传密码，指导蛋白节的合成。读取密码的过程称为转录，是以DNA双链中的一条单等为模板节录出一段称为mRNA（信使RNA）的核醪分子。 DNA是由许多脱氧核苷醪按一定碱基顺序彼此用3，5-磷醪二酯键相连杓成的长等。大多数DNA含有两条这样的长等，也有的DNA为单等，如大肠杆菌噬菌体0X174、G4、M13等。DNA有环形DNA和链状DNA之分。在某些类型的DNA中，5-甲基胞嘧啶可在一定限内取代胞嘧□啶，其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些噬菌体中，5-岑甲基胞嘧啶取代胞f嘧啶。40代后期，查加夫（E.Chargaff）发现同物种DNA的碱基组成同，但其中的腺嘌呤数等于其胸腺嘧啶数（A=T），鸟嘌呤数等于胞嘧啶数（G=C），因而嘌呤数之和等于嘧啶数之和，-般用几个层次描绘DNA的结构。 浓盐法以动物组织中提取DNA 植酸和蛋白节在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可用同浓的NaCl溶液将其以样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白节沉淀除去可得DNA上清，加入乙醇即可将其呈纤维状析出。 肝脏细胞 肝脏是由肝细胞组成，肝细胞极小，肉眼看到，必须通过显微镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞，5000个肝细胞组成一个肝小叶，因此人肝的肝小叶总数约有50万个。肝细胞为多角形，直径约为20-30/加（微米），有6-8个面，同的生条件下大小有差异，如饥饿时肝细胞体积变大。每个肝细胞表面可分为窦状隙面、肝细胞面和胆小管面三种。肝细胞面含有许许多多复杂的细微结构：如肝细胞核、肝细胞质、线体、内节网、溶酶体、高尔基氏体、微体及饮液泡等组成。 二、实验目的 1.掌握浓盐法以动物组织中提取DNA的原与技术三、实验原 植酸和蛋白节在生物体中常以核蛋白（DNP/RNP）的形式存在，其中DNP能溶于水及高浓盐溶液，但在0.14M的盐溶液中溶解很低，而RNP则可溶于低盐溶液，因此可用同浓的NaCl溶液将其以样品中分别抽提出来。 将抽提得到的DNP用SDS处可将其分离DNA和蛋白质，用氯仿-异戊醇将蛋白节沉淀除去可得DNA上清，加入乙醇即可将其呈纤维状析出。 四、实验器材和材试剂 实验器材： 匀浆器筒离心机离心管试管吸管恒温水浴锅 实验材： 猪肝 实验试剂： 0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠溶液（pH6.8）95%c^（A.R.）NaCl固体（A.R.）5%SDS溶液（5gSDS定容至100ml）V（氯仿）：V（异戊醇）20：1的混合液五、实验操作 称 ①称取-定节的猪肝，加入2倍肝重的0.1mol/LNaCl-0.05mol/L柠檬酸钠缓冲液并用匀浆器磨碎（已完成）