水禽新型星状病毒病诊断技术.pdfVIP

水禽新型星状病毒病诊断技术 1 范围 本文件规定了水禽新型星状病毒病流行病学、症状、病理变化等临诊诊断和反转录-聚合酶链式反 应（RT-PCR ）、实时荧光定量RT-PCR和病毒分离鉴定、间接ELISA检测等实验室检测诊断的技术要求。 本文件适用于水禽新型星状病毒病的诊断、检测、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水和试验方法。 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 临诊诊断 4.1 流行病学 4.1.1 该病一年四季均可发生，以冬春季节为多。 4.1.2 各品种鹅（如豁眼鹅、扬州白鹅、朗德鹅、泰州鹅、皖西白鹅等）和鸭（北京鸭、樱桃谷肉鸭、 麻鸭、枫叶鸭等）均可感染发病。 4.1.3 鹅发病日龄见于3 周龄内，其中5 日龄至20 日龄多发；鸭发病日龄多见于2 日龄至11 日龄。 4.1.4 鹅群发病率约80%，死亡率2%~60%不等；鸭群死亡率在5%~20%之间，最高可达30%。 4.2 临床症状 1 4.2.1 自然感染病例5 日龄~6 日龄陆续出现发病和死亡，12 日龄至13 日龄达到死亡高峰，后死亡数 逐渐下降。 4.2.2 患禽表现精神沉郁，头颈震颤，四肢瘫软，卧地倦动。 4.2.3 继而出现食欲废绝，排白色稀便，消瘦，呼吸困难，眼睑、角膜混浊。 4.2.4 大部分雏禽出现症状不久即死亡。 4.3 病理变化 4.3.1 眼观病理变化 4.3.1.1 死亡禽腹膜尿酸盐沉积（见A.1 ），心脏、肝脏表面有尿酸盐渗出物覆盖（见A.2 ）。 4.3.1.2 有的肝、脾、心、肠系膜表现形成一层白色薄膜。 4.3.1.3 部分腿部关节表面和肌肉组织可见点状或片状尿酸盐沉积（见A.3 ）。 4.3.1.4 肾脏肿大、色变浅，表面形成白色斑点花纹，切开可见大量尿酸盐沉积。 4.3.1.5 输尿管内存在明显尿酸盐沉积（见A.4 ）。 4.3.2 组织学病理变化 4.3.2.1 肝细胞空泡变性，肝组织有尿酸盐晶体。 4.3.2.2 肾小管上皮严重坏死、脱落，肾小管管腔内充满大量尿酸盐颗粒。 4.3.2.3 心肌水肿，有尿酸盐结晶。 4.4 结果判定 符合上述流行病学特征、临床症状和病理变化的水禽病例，可以判为疑似新型星状病毒病。确诊应 采集有临床症状的病死禽的组织或血清进行实验室诊断。 5 样品采集与处理 5.1 仪器设备 5.1.1 手术剪刀和镊子。 5.1.2 离心管。 5.1.3 样品保存管。 2 5.1.4 组织匀浆器。 5.1.5 采血器(10 mL) 。 5.1.6 滤器（孔径0.22 μm ）。 5.2 试剂材料 5.2.1 0.01 mol/L pH7.2 PBS，按照附录B 中的B.1 ； 5.2.2 青霉素（100 000 IU/mL）； 5.2.3 链霉素（100 mg/mL）。 5.3 样品采集 5.3.1 生物安全措施 样品采集、保存与运输应按照NY/T 541-2016技术规范进行。 5.3.2 组织病料采集 5.3.2.1 活禽采样：灭菌棉拭子插入泄殖腔旋转2 圈～3 圈后，放入含青霉素4000 IU/mL 和链霉素4 mg/mL 的无菌PBS 样品保存管中。 5.3.2.2 病死禽采样：无菌采集病死禽肝脏、脾脏和肾脏，放入样品保存管中。 5.3.3 血清样品采集 5.3.3.1 采样人员应按照NY/T 541-2016 中6.1.2.5 方法进行翅静脉血液采集。 5.3.3.2 实验人员应按照NY/T 541-20 16 中6.1.3.3 方法将血液处理为血清样品。 5.4 样品处理 5.4.1 组织样品处理 5.4.1.1 棉拭子样品：经剧烈震荡后，10 000 r/min 离心10 min，取上清作为检测材料。 5.4.1.2 组织样品：