重组DNA技术的基本工具
第3章 基因工程
DNA的粗提取与鉴定
基础知识
(一)提取生物大分子的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取DNA,去除其他成分。
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。
DNA粗提取的基本思路:
实验原理
1.DNA在NaCl中的的溶解性:
在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;
NaCl溶液浓度大于0.14 mol/L时,DNA的溶解度与NaCl溶液浓度呈正相关;
NaCl溶液浓度小于0.14 mol/L时,DNA的溶解度与NaCl溶液浓度呈负相关;
溶解:用浓度为2mol/L的NaCl溶液
析出:在NaCl溶液中加水稀释, 使其浓度降至0.14mol/L或95%的酒精
DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。
实验原理
3.DNA的鉴定
试剂:
条件:
二苯胺
沸水浴条件下,DNA遇二苯胺试剂呈现蓝色
沸水浴
现象:
实验设计
研磨
不同生物的组织中DNA含量不同。在选取材料时,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。
选材
处理
(步骤)
过滤
离心
(酒精)溶解
离心
溶解
鉴定
思考:
1.两次离心后,收集的内容一样吗?有什么区别?
2.两次溶解用的是同种试剂吗?两次溶解的目的一样吗?
释疑
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