敲低c17orf64基因对mcf7细胞增殖和凋亡的影响.docxVIP

PAGE 12 摘 要 　　C17orf64基因是一个与精子形成密切相关的睾丸组织特异性表达基因,通过生物信息学分析发现该基因在于人乳腺癌细胞中高表达。本研究通过RNA干扰技术来敲低MCF-7细胞中C17orf64基因的表达，然后通过qRT-PCR和免疫印迹法来分别验证该基因被敲低的程度，最后应用MTT法对干扰C17orf64基因表达后MCF-7细胞的活力进行检测，并采用 Annevix V/PI双染法流式细胞术分析该基因对细胞增殖和凋亡的影响。所得结果显示：在所有组中，si-C17orf64-2组的干扰效果最为明显。转染siRNA后，发现与Blank组、NC siRNA组相比较来说，si-C17orf64-RNA组的OD490值增加，细胞活力上升，且凋亡率下降。由此我们可以得出：C17orf64基因能够促进MCF-7细胞的凋亡，而抑制细胞的增殖。 关键词： C17orf64基因，细胞增殖，RNA干扰，细胞凋亡 第一章 绪论 1.细胞增殖 1.1.1.有丝分裂简述 　　有丝分裂又称间接分离，在分裂过程中有纺锤体和染色体的形成。细胞有丝分裂是通过一个周而复始的连续过程即细胞周期来实现的[1]。通常情况下，我们把从一次分裂完成时开始，到下一次分裂完成时结束所经历的全过程视为一个细胞周期[2]。细胞周期是一个非常精细复杂的过程，受到多方条件的严格把控，特别是来自于某些基因的时空性表达的影响[3]。我们已知，细胞有丝分裂周期可分为分裂间期和分裂期，在分裂间期时细胞需要完成对相关蛋白的合成（如微管蛋白）以及亲本DNA分子的复制，同时还要对一些与有丝分裂密切相关的结构进行组装，如染色质，中心体等结构，该期可分为G1期,S期,G2期；而分裂期就是间期复制好的遗传物质借助纺锤丝被均等地分配到两个子细胞中去，以实现遗传物质的传递，包括核分裂和胞质分离两个阶段。 1.1.2.减数分裂简述 　　减数分裂过程比有丝分裂更为复杂，它在有性生殖生物的配子形成过程中发挥重要作用，减数分裂异常会造成遗传病的发生，后代不育等严重后果。在减数分裂过程中，DNA只复制一次，而细胞连续分裂两次，并且期间还伴随着同源染色体中非姐妹染色单体的交叉互换以及非同源染色体的自由组合，最后形成四个染色体数目减半的子细胞 [4]。而后可通过受精作用，使得雌雄配子结合形成合子，染色体数目又恢复到亲本水平。由此可知，减数分裂能够像有丝分裂由于将遗传物质均等的分给后代后，再通过受精作用使染色体数目复原，既保证了后代遗传的稳定性，又为生物进化提供了大量的原材料，有利于生物对环境的适应。 　　减数分裂细胞周期与有丝分裂存在很大的差异，它的分裂期可分为两个阶段，即减数分裂Ⅰ和减数分裂Ⅱ，其中减数分裂Ⅱ与有丝分裂期相似。而前期Ⅰ完成的正确性对减数分裂的正常进行具有重要作用，它的所占时间最长且染色体变化也最复杂。该期内染色体会缩短变粗并且发生联会、配对和重组，能够促进遗传物质的交换，确保配子体遗传物质的相对稳定性以及单倍性[5]。 1.1.3.无丝分裂简述 　　和其他分裂方式不同，无丝分裂在分裂时没有纺锤丝与染色体的形成[6]，即它没有明显的细胞周期，同时不需要消耗过多的能量就可以完成，无丝分裂进行的方式主要有芽裂，缢裂，碎裂，变形虫状裂和劈裂五种[7]。除此之外，它还具有分裂相对独立，分裂速度快等特点。起初人们认为无丝分裂仅出现在病变的，高度分化的细胞中，但是经过大量的研究发现，无丝分裂还存在于动植物正常的组织器官中，甚至是在一些真菌和部分原生生物中也存在。比如：人的肝细胞，酵母菌等。但是进行无丝分裂的过程中，不能保证遗传物质均等的分给子细胞。 2.细胞凋亡 1.2.1.细胞凋亡简述 　　细胞凋亡是受基因严格调控的有规律地生理性细胞自杀行为[8]。细胞凋亡是各种生命活动正常进行的保障，如对保持细胞数量稳定、维持机体稳态、免疫耐受的形成、肿瘤监控等多种生理及病理过程具有非常重要的生理意义 [9]。细胞凋亡从胎儿发育到机体死亡一直存在，它可以使机体内受到损伤的、不被需要的或存在会危害机体的细胞死亡，但进行过程中不会伤害附近正常的组织或细胞。但是，机体中细胞凋亡的失调，可能会引发多种疾病，这种失调包括不恰当的激活或抑制[10]。一个方面抑制细胞凋亡可能会产生多种疾病。另一方面过度凋亡可能会导致机体免疫功能的丧失，或引发自身免疫疾病和炎症[11]。 1.2.2.影响细胞凋亡的因子 　　细胞凋亡是一个由多种基因严格把关精准调控的过程 ，它在维持机体内环境稳定方面具有重要作用。蛋白酶 Caspase家族成员在细胞凋亡过程中发挥了重要作用[12]。Caspase家族的主要生理作用是对靶蛋白进行特异性的切割，使其活化或“沉默”，但不能完全降解。它们具有类似的结构，即其活性位点均包含有半胱氨酸残基，