《转基因食品与安全》第5章转基因食品的检测和分析.pdfVIP

第五章转基因食品的检测 和分析 转基因食品的检测和分析：是指对深加 工食品和食品原料种的转基因成分进行 检测。 检测主要针对其中的DNA、蛋白质或脂肪 酸等成分。 □基于DNA的检测方法可分为两类： 基于PCR的检测方法 第一节转基因阳性个体的分子鉴定 一、PCR技术 (一)标准PCR 1.优点 快速、灵敏、费用低，检测仅需微 量DNA,可同时检测多个样品。 PCR DNA 快速扩增DNA的方法。 ◆PCR反应包括三个步骤： 双链变性成单链。 ●复性：两个引物分别与单链DNA 互补复性，复性的温度在50-60℃ ●延伸：在引物的引导及Taq酶的 作用下，于72℃合成模板DNA的互补 链 这三个步骤称为一个循环， PCR反应常有25-35个循环。 图9-15 PCR扩增DNA。 2.程序 提取待测样品DNA — 设计引物、进行PCR →PCR产物凝胶电泳检测 (1)提取DNA:经琼脂糖凝胶电泳检测完整性 (2)引物设计 目的基因 外源DNA 启动子： CaMV 35S 终止子：Nos 大多数转基因作物的启动子是 终止子为Nos,来自植物细菌，PCR检测 是对启动子、终止子的检测。 (3)琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离扩 增产物。 扩增条带的分子量与理论上应产生的 分子量相同，则说明被检测对象的基因组 中含有外源基因。 kb M C 2.0- 1.0- 0.5 例如：转基因棉花选择标记基因NPTII 编码区段的PCR扩增结果(M为分子量 标准，C为非转基因植株，P为质粒对 照，1-20为转基因植株) (二)定量PCR法 可知样品中含有多少量的外源基因。 如：竞争性PCR技术。 二、斑点印迹法 原位杂交：利用放射性或非放射性标记的已知核 酸探针，通过放射自显影检测特异DNA或RNA序列 的一种技术，是一种直接、简便的研究基因定位 和表达的方法。 提取DNA—→转移至硝酸纤维素膜上 杂交 以转入基因的片断作为探针 →放射自显影 概念： ·探针：用化学方法将有识别能力的物质(如 抗原、一段与目的基因互补的核酸序列)与 酶或同位素结合成复合物作为探针。 ·固相载体：用于吸附生命大分子物质的固体 材料。 ·印记：把经凝胶电泳后的组分，通过吸附或 电泳方法转移或者直接吸附到固相载体上的 过程。 三、Southern杂交 提取DNA—→内切酶消化——琼脂糖电泳 →转移至硝酸纤维素膜 杂交 探针 →放射性自显影 如果膜上具有与杂交探针相同或部分同源的序列， 就会检测到杂交带信号。 DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、 DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有 重要价值。 Sample with tracking dye being loaded into well Cell Polyacrylamide gel slab posi