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不同硫离子浓度对超积累生态型东南天文重金属积累的影响 随着工农业和人类生活的发展，土壤中的重金属污染日益严重，威胁到链中上部的人类健康。在众多的土壤重金属修复方法中,以植物修复为代表的生态修复方法以其廉价、安全的特点受到人们越来越多的重视。由杨肖娥等首次发现的原产于我国的Zn/Cd超积累生态型东南景天,其地上部对锌、镉及铅等重金属有极强的积累能力,而且生物量大、生长快,显示出良好的应用前景。 众多前人的研究表明:小分子硫醇有机物如谷胱甘肽(reduced glutathione, GSH)、植物螯合肽(PC)、金属硫蛋白及有机酸等对于植物重金属耐性和积累能力方面有重要作用。本文以Zn/Cd超积累生态型东南景天为材料,研究总硫、GSH与Zn/Cd超积累的关系,为深入认识植物超积累的分子生理机制提供科学依据。 1 材料和方法 1.1 高水势梯度体的培养 超积累生态型东南景天取自浙江省衢州市的一个废旧铅锌矿,用带有顶芽的茎段进行预培养后备用。预培养方法为:自来水培养生根后,经1/4营养液培养1周、1/2营养液培养1周、正常营养液培养1周。所有培养过程均在人工气候室内进行,相对湿度维持在70%~80%,白天温度26℃,夜间20℃,16 h光照8 h黑暗交替,每天调整1次pH值,每4 d换1次营养液,通气培养。硝酸锌[Zn(NO3)2]和氯化镉(CdCl2)均为AR级,购自上海生工生物工程技术服务有限公司。 1.2 利用cdcl2进行苗分化 经过预培养的苗用含1000 μmol·L-1的Zn(NO3)2或200 μmol·L-1的CdCl2营养液处理25 d,每隔5 d取地上部进行化学分析;另取一批苗也用1000 μmol·L-1的Zn(NO3)2或200 μmol·L-1的CdCl2处理,但营养液中的SO42-控制在0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mmol·L-15个水平(如果SO42-处理浓度需要高出正常营养液水平,直接加入K2SO4;若需要低于正常营养液水平,则减少营养液配方中的K2SO4,补充KCl以维持正常的K+浓度),处理20 d后测定地上部Zn/Cd含量。 1.3 吸光度的测定 样品烘干后,用HNO3-HClO4消化,以空白样品为阴性对照,ICP-MS测定各处理的Zn/Cd含量;消化后的样品加入BaCl2在400 nm下测定吸光值。用标准曲线换算各样品的总硫含量;GSH含量测定:于冰上研磨新鲜样品,按照南京建成生物工程研究所的GSH测定试剂盒说明书进行测定。 实验数据均为3次重复的平均值,用Microsoft Excel XP做统计学分析。 2 结果与分析 2.1 硫浓度对zn/cd积累能力的影响 地上部Zn/Cd的积累都随着处理时间的增加而增加(图1),到25 d时锌的积累量达到32280 mg·kg-1,镉的积累量达到9380 mg·kg-1,显示出极强的Zn/Cd富集能力以及作为重金属污染土壤修复的应用潜力。前15 d地上部Zn/Cd积累量基本呈线性增加,后10 d积累速度明显变缓。20 d时地上部积累基本达到最大值,Zn/Cd含量分别达到31075 mg·kg-1和9278.333 mg·kg-1,所以在测试硫浓度对Zn/Cd积累能力的影响时,采用20 d的培养时间。 在根中,Zn含量先增加后下降(图2),前5 d增加非常迅速,5~15 d期间缓慢增加,15~25 d又逐渐下降;镉含量也是在前5 d迅速增加,但此后的20 d一直下降。 2.2 mol3gf含量的变化 地上部GSH含量在Zn/Cd处理的前15 d呈逐渐增加趋势,到15 d分别达到277 μmol·kg-1FW和1610.5 μmol·kg-1FW,15 d后含量逐渐下降,到25 d时分别下降到98.3 μmol·kg-1FW和1010.5 μmol·kg-1FW,相当于在处理5 d时的GSH含量(图3)。在整个变化过 程中,虽然Cd的积累量低于Zn,但Cd处理时所诱导的GSH含量都高于同时间点Zn处理时的诱导量,这说明Zn作为一种必须营养元素,在大量积累时对细胞的毒性低于Cd的毒性。 2.3 gsh在天麻体内的变化 Zn/Cd处理时地上部总硫含量的变化趋势与GSH含量变化趋势基本一致,都呈现前15 d上升后10 d下降的变化趋势(图4),说明在景天体内GSH可能是硫存在的主要形式;同时也可看出含硫有机物不是锌镉积累的最终结合物质(不是重金属的最终配体),否则总硫含量应出现一直上升的趋势。 2.4 硫及gsh含量 从表1可以看出,在低硫水平下(0.5、1.0 mmol·L-1SO42-处理浓度时东南景天不显示缺硫症状)增加硫的供应可明显提高地上部Zn/Cd积累值,但供硫对Cd积累效果大于Zn,这与Zn/Cd处理不同时间下硫及GSH含量的变化趋