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饮用水中内分泌干扰效应的分析评价 美国环境管理局（idc）对内部干预药物的定义是：它是一个外源性物质，可以改变身体的内部结构，并对身体的、后代或亚组产生副作用。它通常存在于各种环境条件中，通过各种方式进入人类和动物体内，对身体的内部导管系统，尤其是生殖系统产生重大影响。如果你用gl-1或gl-1进行，或更低的浓度。目前，通过色度技术进行了各种测试和研究。由于检测技术的局限性，很难确定非常低的eds。这些物质不会对人体或其他生物产生任何影响。根据研究，即使sdi-1的单独成分浓度较低，并且检测费用也低于l-1。即使它们的几种共生形式同时存在，它们也会影响正常的室内生殖器类的代谢和繁殖机制。因此，为了全面评估饮用水中edc对人体健康的影响，有必要分析和评估水源和饮用水中的内部干扰效应，了解sdc对水源和饮用水中的污染，以及不同传统处理方法和配水管网对内部干扰效应的影响。 本研究以松花江哈尔滨段上、中、下游江水, 以及以松花江为水源的哈尔滨市某自来水厂进厂原水、各处理工艺单元出水及管网末端饮用水为对象, 利用固相萃取/酵母双杂交法, 调查了以上各水体的雌激素活性, 分析了传统净水工艺对内分泌干扰效应的去除情况, 以期为保护人体健康及相关政策法规的制定提供基础科学依据. 1 材料和方法 1.1 试剂和仪器 雌二醇 (17β-Estradiol, E2) 、二甲基亚砜 (dimethyl sulphoxide, DMSO) 和邻硝基酚-β-D-半乳糖苷 (o-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside, ONPG) 购自Sigma公司, 无氨基酸酵母氮碱 (yeast nitrogen base without amino acids) 购自Difco公司, DO/-Leu/-His添加剂购自Clontech公司.HPLC级甲醇购自Dikma公司, 色谱纯级二氯甲烷购自天津科密欧公司, 超纯水为Milli-Q纯水仪制得, 18.2 MΩ·cm-1.其余试剂为国产分析纯. 1.2 水样预处理及固相萃取处理sem 于2006年与2007年的夏季与秋季 (7～10月) , 每个季度2次, 以哈尔滨市为中心在松花江沿线自上而下同时采集了4处水样, 分别为上游四方台水源地水A、中段水B (公路大桥上游约200 m处) 、中段水C (东滨铁路桥上游约500 m处) 及下游水D (污水厂下游约2 000 m处) .于2007年4、5、6及9月, 每月1次, 同时采集了哈尔滨市某自来水厂进厂原水、混凝沉淀后出水 (沉后水) 、砂滤后出水 (滤后水) 、氯消毒后出厂水 (出厂水) 及用户管网末端自来水 (管网水) .除此外, 还于2006年9、10月及2007年1月又分3次采集了管网水.水样预处理采用国际上最常用的固相萃取法.为了防止水中的悬浮颗粒在固相萃取过程中堵塞填料, 其中的目标物分两部分分别进行富集与测定:水样取回实验室后立即过1 μm玻璃纤维滤膜 (Whatman) , 对滤过液用浓硫酸调pH2后固相萃取富集, 对膜上截留的颗粒物质采取冻干处理.实验用玻璃器皿及玻璃纤维滤膜全部预先500℃灼烧2 h. 实验选用Waters C18固相萃取小柱, 于水样浓缩前依次用5 mL甲醇与5 mL Milli-Q水活化小柱, 富集时调节系统 (Supelco VisiprepTMDL十二管防交叉污染固相萃取装置) 真空度使水样过柱流速大约控制在10 mL·min-1.洗脱时用甲醇/二氯甲烷 (80/20, 体积比) 混合洗脱液共10 mL分2次洗脱柱子.2次洗脱液合并后, 轻柔氮气吹干, 最后用DMSO定容.各水样富集浓缩6 000～8 000倍. 将已冻干截留有颗粒物质的玻璃纤维膜, 剪成约为5 mm×5 mm的小块, 加一定量的甲醇/二氯甲烷混合萃取剂隔夜浸泡, 再超声波辅助萃取3次, 每次5～10 min.萃取液氮气吹干后DMSO定容.考虑到实验所用溶剂及样品浓缩富集过程中有空白来源, 所以对3份1 000 mL超纯水做相同处理步骤作为试剂空白, 结果均呈阴性反应.上述两部分测定结果之和为水样总雌激素活性. 1.3 诱导活性测定 实验所用转基因酵母菌由中国科学院生态环境研究中心提供.该酵母菌是人工构建的一种能够同时表达人雌激素受体基因和受体共激活因子GRIP1基因的双杂交酵母. 测试方法见文献, 本研究中稍加改进.将菌种接种至SD/-Trp/-Leu培养基中, 在30 ℃、130 r/min条件下培养.当菌悬液生长至600 nm处吸光度值 (D600) 为2～6时, 用同一培养基稀释菌悬液至D600值为0.75左右, 移取稀释后的菌悬液0.995 mL于1.5 mL离心管中, 加入5 μL待分析样品, 混合均匀.每个样品设3