免疫学的检测工作和免疫学技术.pptxVIP

免疫学的检测工作和免疫学技术;一、概述;一、概 述;一、概述;二、抗原抗体的检测技术 * 根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉淀反应和补体参与的各种反应。;凝集试验;凝血实验;间接凝集抑制试验;间接凝集抑制试验检测HCG;Coomb’s 实验;病毒间接凝集抑制试验;沉淀反应;沉淀反应的曲线图;单向琼脂糖扩散实验;单扩与双扩原理;双扩结果分析;火箭电泳;对流免疫电泳;补体结合试验;补体结合试验;补体结合试验;免疫印迹实验;Western Blot 检测HIV;一、概述;三、免疫细胞的检测;密度梯度离心分离淋巴细胞;E花环实验;利用表面标志分离淋巴细胞亚群;T细胞系的获得;FACS 原理;利用FACS技术行细胞分选;FACS技术分离CD4+T细胞和 CD8+T细胞;FACS 技术分析;用小鼠单抗借助间接荧光法检测特异性CTL;用抗CD34单抗分离造血干细胞;用免疫磁珠法检测CD8+T细胞;(二) 免疫细胞功能的测定;淋巴细胞增殖实验;单向MLR;(2)T细胞介导的细胞毒试验：CTL (3)T细胞功能的体内检测法 接触性超敏反应 移植物抗宿主反应(GVHR) 迟发型超敏反应(DTH);51Cr 释放法细胞毒实验;51Cr 释放法细胞毒实验;MHC-抗原肽四聚体技术;HLA-抗原肽四聚体结构示意图;HLA-抗原肽四聚体用于检测或分离特异性T细胞;皮肤实验;三种皮肤实验结果比较;GVHR的皮肤表现;2. B细胞功能判定;溶血空斑实验;溶血空斑实验;ELISPOT实验;3. NK细胞活性测定;(4)化学发光法 (5)流式细胞术 应用FCM检测NK细胞活性是根据PI染料排斥法。PI 入死亡细胞内与DNA和RNA结合，在 488nm波长激发下产生绿色荧光。此法既可以测定单个细胞毒活性，也可以用于总细胞毒活性试验。 还可利用荧光染料法,细胞光扫描法，双标记细胞毒法测定细胞毒性细胞的杀伤效应。;4．吞噬细胞功能测定 中性粒细胞趋化功能测定 一般采用滤膜渗透法(Boyden小室法)或琼脂糖平板法。 中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定 显微镜检法 NBT试验：此项试验是测定中性粒细胞吞噬、杀菌功能的一种简易方法。 化学发光测定法：中性粒细胞在吞噬过程中出现呼吸爆发,产生活性氧代谢产物。此类活性氧化基团与细胞内杀菌作用密切相关，同时又能激发细胞内某些物质产生化学发光。;巨噬细胞吞噬功能测定 中药斑蝥酒精浸液敷贴法诱发无菌性皮炎，从皮肤水泡渗出液中收集巨噬细胞，在体外进行鸡红细胞吞噬试验，计算吞噬率和吞噬指数，作为判断巨噬细胞吞噬功能的指标。 巨噬细胞细胞毒测定 通常取小鼠腹腔巨噬细胞，以 -干扰素为激活剂使其活化，作为效应细胞。用125I-UdR 标记的DBA/2小鼠肥大细胞瘤P815作为靶细胞。;一、概述;细胞因子及其受体的检测;免疫学检测的基本原理是将细胞因子作为抗原进行定量检测。如免疫斑点法、ELISA法、RIA法和免疫印迹法等均已用于细胞因子的检测。某些细胞因子含量甚微的样品(如脑脊液)可用免疫聚合酶链反应(immuno-PCR)进行检测。;细胞因子及其受体的检测;根据细胞因子对特定的生物学活性,应用相应的指示系统,同时与标准品对比测定,从而得知样品中细胞因子的活性水平, 一般以活性单位(U/ml)表示。 靶细胞可直接从组织中分离,如骨髓细胞的集落形成试验和胸腺细胞(脾细胞)的增殖试验,或用体外培养的依赖细胞因子才能生长的细胞因子依赖株及对细胞因子杀伤敏感的细胞作为靶细胞。;1、促进细胞增殖和增殖抑制法 * 多种IL、表皮生长因子、转化生长因子α、神经生长因子、血小板衍生生长因子、成纤维 细胞生长因子、血管内皮细胞生长因子;2、细胞毒活性测定法 某些细胞因子(TNF)针对转化的细胞及病毒感染的细胞具有溶细胞或抑制细胞生长的活性。;3、抗病毒活性测定法 常用于检测抗病毒活性的细胞株有WISH， Hep2/c，L929，A549和MDBK等。其中WISH和 Hep2/c细胞株用以检测人干扰素，L929细胞株用于检测小鼠干扰素，Ratec细胞株用于检测大鼠干扰素，而MDBK细胞株则可用于检测多种属的IFN-α和IFN-γ。;4、趋化活性测定法 * 多种细胞因子具有趋化活性, 分别能诱导中性粒细胞、单核/巨噬细胞和淋巴细胞等定向迁移； * 趋化因子诱导细胞移动的方式包括趋化性和化学增活现象。 趋化性(chemotaxis)是指诱导细胞向趋化因子化学浓度高的方向作定向移动,可采用琼脂糖和微孔小室趋化试验测定细胞因子的趋化活性； 化学增活现象(chemokinesis)是指增强细胞的随机运动,可采用琼脂糖小滴化学动力学试验检测。;细胞因子及其受体的检测;分子生物学测定法;细胞因子及其受体的检测;单个细胞产生细胞因子测定法;ELISPOT法检测细胞因子;细