南水北调对钉螺生存繁殖力的影响.docxVIP

南水北调对钉螺生存繁殖力的影响 严重危及人类健康，阻碍社会经济发展的寄生虫。全球有76个国家和地区流行血吸虫病,流行区人口约6亿,感染者约2亿,患者约2千万。中国主要流行日本血吸虫病,目前流行区主要分布在长江中下游沿岸5省的湖区和云南、四川2省的大山区,血吸虫病人671 265例。钉螺是日本血吸虫的惟一中间宿主,是构成血吸虫病传播的不可缺失环节。中国大陆钉螺分布区位于北纬33°15′ 以南地区。流行病学研究证明,中国钉螺的地理分布区与血吸虫病流行区呈高度的一致性,凡有血吸虫病流行的地区必有钉螺孳生。控制与消灭钉螺是控制与阻断血吸虫病传播的主要措施之一。 南水北调是我国优化水资源配置,解决北方地区缺水的一项战略性措施,关系到我国北方地区经济、社会和生态环境可持续发展的长远利益。从长江下游江苏段引水北上的南水北调东线工程,因其引水口处在有日本血吸虫中间宿主湖北钉螺孳生的江苏省江都市,并且输水干线途经我国钉螺分布区并从分布区最北点的宝应县(北纬33°15′)境内进入非分布区,因而,在工程建成并实现供水后,钉螺随水流向北迁移扩散可能性难以完全排除。为了研究因南水北调将钉螺带到北纬33°15′以北地区后,钉螺能否生存与繁殖,并形成新的有螺区,从而可能导致中国血吸虫病流行区向北扩展,本研究沿工程输水干线现场设点,采用螺笼放养钉螺的方法,对放养在北方地区的钉螺生存繁殖力进行了为期8a的现场定量纵向观察,并采用组织学、组织化学、酶组织化学和电镜技术观察北移钉螺的生殖腺变化,以期为南水北调工程安全运行提供论证依据。 1 内容和方法 1.1 实验观察点位置 沿着南水北调输水干线分别选择山东济宁(北纬35°23′)和江苏徐州(北纬34°21′ )作为实验观察点,两地均为血吸虫病非流行区,均无钉螺孳生;选择江苏镇江(北纬32°10′)作为对照观察点,该地历史上是血吸虫病重度流行区,沿江江滩至今仍有钉螺分布(图1)。实验现场和对照现场均设在能长年保持稳定水位的自然水塘边,周围无排放污水的工厂,各点常年均有专人看护。 1.2 材料表面 1.2.1 血吸虫感染阳性钉螺的分离培养 实验用钉螺采自江苏省南京市龙潭江滩,实验前以群体逸蚴法剔除血吸虫感染阳性钉螺,挑选爬动活跃的幼螺(体长5 mm),在体视显微镜下区分雌雄后分别饲养,备用。 1.2.2 细孔铁丝网 实验用螺笼系用8号铁丝扎制成200 mm×100 mm×100 mm的框架,周围覆以粗孔铁丝网,内衬14孔/25.4 mm窗纱和120孔/25.4 mm尼龙纱绢。笼底铺有一层厚10 cm、带有完整植被的当地泥皮。 1.3 钉螺的生存和繁殖观察 1.3.1 螺笼的采集 于1991年9月初,在每只螺笼内放置100只实验钉螺(雌雄各半),用细铁丝封紧笼盖后,将螺笼呈30°角倾斜放置在3个观察现场的水塘边,以使螺笼内泥土1/3浸在水中,2/3在水线上(图2)。而后每3个月分别从各现场提取2只螺笼,用20孔/25.4 mm铜丝筛筛洗笼内泥土,收集全部钉螺,用敲击法鉴定钉螺死活,计算钉螺死亡率。 1.3.2 幼螺孵化和放养 于1992年2月初,在3个现场分别筛取放养活螺100只(雌雄各半),重新设框,方法同上。3～6月间,每隔30 d 用120孔/25.4 mm铜丝筛筛洗笼内泥土1次,在解剖镜下分离捡获螺卵。筛出的钉螺重新放回新铺泥土的螺笼内继续放养。观察钉螺在当地产卵量。 5月份从3个现场钉螺所产的同一批螺卵中,分别选取1 000只泥皮完整的螺卵置于直径9 cm的培养皿中,加入当地水塘水至水深2 cm,置室温(25 ℃)下孵化。每隔5 d用吸管吸出幼螺,记录孵出的幼螺数,并补充培养皿内的水,保持水深为2 cm。共观察30 d,计算孵化率。取同批孵出的子代幼螺各500只,分别置螺笼内放养于现场。5个月后以20孔/25.4 mm铜丝筛筛洗笼内泥土,收集全部钉螺,统计活成螺(体长5 mm)数量。 1991年9月,在3个现场分别设置2个螺笼,内置200只钉螺(雌雄各半)放养在现场,分别于1、2a后用20孔/25.4 mm铜丝筛筛洗笼内泥土,收集全部钉螺,以敲击法鉴定钉螺死活,统计放养1、2a的钉螺增殖数。 1.4 螺、螺的放养 放养3个月后(1991年11月),分别从3个现场筛取活雄螺,放养6个月后(1992年3月)筛取活雌螺。两次采集的钉螺标本均参照文献方法破壳,解剖镜下去壳,暴露钉螺软体,分离睾丸或卵巢,挑选无机械损伤的生殖腺,分别作如下处理: (1) 学习准备 置10%福尔马林溶液中固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色。 (2) dna的纯化 置100%乙醇中固定6 h,常规石蜡包埋、切片,参照文献方法显示糖原(PAS反应)。 将切片放入60 ℃ 1 mol·L-1的HCl溶液中60 min,4 ℃ 1 mol·L-