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阿胶治疗不孕症患者子宫内膜容受性的临床研究 子宫内容感是指子宫内的胎盘接受程度。也就是说，子宫内的内膜允许复制和渗透胚胎，改变胚胎的间隙，直接影响胚胎的生长。近年来不孕症发病率明显上升, 子宫内膜容受性不良直接影响胚胎植入, 因此改善子宫内膜容受性成为亟待解决的问题。本研究通过给予不孕症患者口服阿胶, 检测子宫内膜厚度、整合素β3、雌激素受体 (Estrogen Receptor, ER) 及孕激素受体 (Progesterone Receptor, PR) 等与子宫内膜容受性相关分子, 探讨阿胶对于不孕症患者子宫内膜容受性的影响。 免疫组化实验方法 1. 一般资料 选择2009年4月至2011年10月于珠海市妇幼保健院生殖中心就诊不孕症患者60例, 病因为输卵管因素或者男方因素。月经来潮第3天检测卵巢基础性激素, 超声监测排卵功能正常并且排除子宫肌瘤、子宫腺肌症等疾病的患者, 近3个月内未服用任何激素类药物或与本研究相关的药物, 随机将患者分为实验组 (n=40) 和对照组 (n=30) 。实验组患者自月经周期第7天开始给予口服阿胶治疗, 每日阿胶30g炖服, 至下次月经, 连续服用3个月经周期;不接受阿胶治疗的患者进入对照组。两组患者年龄、病程时间, 病因差异均无统计学意义 (P0.05) , 具有可比性。 2. 子宫内膜厚度测量方法实验组患者于口服阿胶第3个周期, 对照组患者于任一月经周期, 两组患者均在月经周期第10~12天开始应用阴道B超进行卵泡大小及子宫内膜厚度监测。当卵巢内最大卵泡平均直径达到16~18mm时, 纵断冻结声像, 测量一侧子宫内膜强回声与声晕交界 (即子宫内膜与子宫肌层交界) 至另一侧子宫内膜强回声与声晕交界之间的距离, 即两层内膜厚度。 3. 免疫组化实验方法 两组患者子宫内膜组织均于B超监测排卵后第7日用宫腔组织吸引器获取, 将组织物置于10%中性福尔马林中保存, 再统一行石蜡包埋后备用。应用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶法 (SP法) 检测子宫内膜整合素β3、ER及PR表达。整合素β3一抗为羊抗人单克隆抗体, 购自广州吉赛生物科技有限公司;ER及PR一抗均为兔抗人单克隆抗体, 购自福州迈新生物技术有限公司。操作步骤包括石蜡切片4μm、烤片、脱蜡水化、高温抗原修复、按照SP试剂盒进行一抗与二抗连接、DAB显色。用于阳性定位及拍照的切片经苏木素轻度复染, 自来水冲洗返蓝, 进行图像分析的切片不复染。切片经过梯度酒精脱水, 二甲苯透明, 中性树胶封片。 4.免疫组化结果判定 应用Leica Q550图像分析系统, 分析未复染切片阳性细胞表达强度。将排除了切片本底因素后的纯免疫组化显色反应程度按灰度图像分析等级, 每一级定义为1个阳性单位, 以阳性单位 (positive unit, PU) 值表示, 计算公式为PU=100 (Gα-Gβ) /Gmax, Gα和Gβ分别代表待测结构和背景的平均灰度, Gmax代表检测仪器的最大灰度。 5. 统计学方法 计量资料以均数±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)表示, 两组间均数比较用两样本t检验。数据应用SPSS13.0软件进行统计学分析, 检验标准取双侧α=0.05,P0.05认为差异有统计学意义。 结果 1. 两组患者莲子群众厚度 两组患者于阴道B超监测卵泡成熟时测量子宫内膜厚度, 统计学分析数据见表1, 实验组患者子宫内膜比对照组患者厚, 差异有统计学意义 (P0.05) 。 2. 膜和初胞菌中膜和初代膜的表达 两组子宫内膜整合素β3表达定位于子宫内膜腺上皮细胞, 其细胞膜和细胞质中均见表达, 以细胞膜表达为主, 间质未见表达。两组子宫内膜细胞膜β3表达强度比较见表1, 实验组患者整合素β3的表达高于对照组, 差异均有统计学意义 (P0.05) 。 3. 间质细胞核表达 ER及PR在两组子宫内膜腺上皮细胞核及间质细胞核中均有表达。其中, ER主要在腺上皮细胞核中表达, PR主要在间质细胞核中表达。两组子宫内膜腺体ER及间质PR表达强度比较见表1, 差异无统计学意义 (P0.05) 。 各组患者治疗前后莲子说2、er及pr的表达比较 阿胶 (Colla Corii Asini) 始载于《神农本草经》, 药用历史已有2000多年, 具有补血滋阴、润燥、止血等功效, 对子宫内膜生长不良患者的子宫内膜有改善作用。阿胶的蛋白质含量约80%, 包括8种人必需氨基酸, 并且含有铁、锌、钙、锶 等20多种有益于人体的微量元素。近年来, 人们对于阿胶的认识逐步深入, 在临床上应用范围不断扩大。药理学研究表明, 阿胶能够促进造血功能, 并有止血、抗疲劳、抗休克、耐寒冷、增强机体免疫功能的作用。妇产科医生应用其多种药理学功效, 主要将阿胶用于治疗功能性子宫出血、不孕症及月经不调