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气相色谱测定桑叶中残杀威残留量 氨基丙烯酸农药有多种类型，其中一些毒性高，通常导致氨基丙烯酸中毒，其中之一是由此产生的垃圾。由于氨基甲酸酯类杀虫剂近年来较广泛地使用,其所引起的食物中毒、误服以及投毒事件时有发生。在临床上抢救中毒患者时,能否快速准确地确定毒物种类对拯救患者生命至关重要。由于残杀威为非常规理化检验项目,目前尚无标准检验方法。经查阅文献,目前国内外常用的检测残杀威的方法包括气相色谱法、气相色谱–质谱法、液相色谱法、液相色谱–质谱法及薄层层析法等。其中液相色谱法是最常用的方法,但该方法前处理较繁琐,分析周期长。气相色谱法由于选择性、分离效能高,分析速度快,灵敏度高,检测限可达到pg级,尤其适用于农残分析工作。目前,就残杀威在桑叶中的残留分析未见报道,本文对气相色谱检测残杀威的方法进行了实验,并加以优化改进,同时提供了样品前处理方法。 1 材料和方法 1.1 仪器、试验装置 岛津2010气相色谱仪(带NPD检测器); HY–5型回旋式振荡器; EYELA N–1001D旋转蒸发仪; N–EVAP111氮吹仪; KQ–3200超声波清洗器; BS110S电子天平; 具塞量筒等玻璃器皿。 乙腈、丙酮、氯化钠均为分析纯,残杀威标准品(纯度99.5%)。 1.2 u3000nacl的稳定性 将桑叶剪碎,称取样品20 g,加入80 mL乙腈,振荡提取1 h。抽滤至盛有5 g NaCl的100 mL具塞量筒中,盖上塞子,剧烈振荡1 min。在室温下静置10 min,让乙腈相和水相分层。准确吸取10 mL上层乙腈相溶液,放入150 m L浓缩瓶中,在旋转蒸发仪上浓缩至近干,用丙酮定容2 m L进气相色谱测定残杀威的含量。 1.3 高纯氢氧流样,特性有以下几种情况 检测器:氮磷检测器(NPD);色谱柱:SPB–50,30 m×0.32 mm×0.25μm;温度条件:柱温150℃保持0 min,25℃/min升至280℃,保持1.8min,残杀威的保留时间为3.34 min。进样口250℃,检测器300℃。 气体条件:载气为高纯氮,2.0 mL·min-1;分流进样,分流比1∶10;高纯氢流速1.5 m L·min-1;空气流速145 mL·min-1。尾吹20 mL·min-1。残杀威标样气相色谱图见图1。 1.4 样品进样体积vx 样品的定性分析采用与农药标样的保留时间相对照的方法,单点峰面积外标法定量。公式如下: 式中:X—待测样品中农药浓度(mg·kg-1);Cs—标样中农药的浓度(mg·kg-1);Ax—待测样品的出峰面积;As—标样的峰面积,由仪器所配工作站自动完成;Vx—待测样品进样体积(μL);Vs—标品取样体积(μL)。 2 结果与分析 2.1 标准曲线的绘制 准确称取50.0 mg(精确至0.000 2 g)残杀威标准样品定容至100 mL容量瓶中,用丙酮溶解定容。再用丙酮梯度稀释为0.1、0.5、1、5、20 mg·L-1,在上述色谱条件下进行测定,以标准溶液浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图2)。由标准曲线可见,残杀威在0.1～20 mg·kg-1范围内,浓度与色谱峰面积呈线性关系,相关系数达0.999 6,可满足残留分析的需要。 2.2 提取剂为单一溶剂 残杀威常用的提取溶剂有乙酸乙酯、甲醇、苯、乙腈等,本研究对这4种溶剂进行萃取率及杂质干扰比较。在桑叶空白样品中添加残杀威浓度为1mg·kg-1,分别用乙酸乙酯、甲醇、苯、乙腈进行提取,其中乙酸乙酯、甲醇、苯的提取液经弗罗里硅土柱净化,乙腈提取液直接浓缩定容后进气相色谱分析,结果见表1。从表1可以看出,用乙腈提取的平均添加回收率最高,变异系数最小,其平均回收率为95.48%,变异系数为6.42%;乙酸乙酯提取回收率最低,为70.77%,变异系数最大,为12.47%。造成4种溶剂萃取率较大差别的原因可能是乙酸乙酯、甲醇、苯提取需要净化处理,增加了实验步骤,降低了回收率;而用乙腈提取后,样品可直接进行仪器分析,实验环节少,损失少,回收率较高。从4种溶剂的提取液杂质干扰看,乙酸乙酯、甲醇、苯提取的杂质较多,不能直接进样分析,需净化后才能进样;单用乙腈提取的效果优于其他3种溶剂的提取,主要是因为乙腈为中等极性的溶剂,用它提取可减少共萃物的干扰,因而选择乙腈为提取溶剂。 2.3 回收率、精密度与定量限 用未施药的空白对照样品,按照上述提取及测定步骤,分别做0.05、1 mg·kg-1两个浓度的添加回收率试验,每个浓度做5个重复,结果见表2。结果表明,残杀威在桑叶中的平均回收率在81.23%～102.54%之间;相对标准偏差(变异系数)6.42%,最小检出量为0.01 ng,最低检测浓度为0.05mg·kg-1,符合农药残留测定要求。 桑叶空白及桑叶残杀威添