全血的提取及电泳演示文稿.pptVIP

本文档共32页；当前第1页；编辑于星期三\21点8分 1.实 验 原 理 DNA 一、全血DNA的提取 本文档共32页；当前第2页；编辑于星期三\21点8分 本文档共32页；当前第3页；编辑于星期三\21点8分 由于血液各组分成分颗粒大小及比重不同，利用明胶的吸附作用，使红细胞沉积在管底，从而与白细胞相分离。 通过SDS的破膜（细胞膜和核膜）作用，使白细胞释放出DNA。 然后利用酚和氯仿抽提纯化，分离去除蛋白质。 最后用乙醇沉淀洗出DNA。 本文档共32页；当前第4页；编辑于星期三\21点8分 2.材料与方法 ⑴.材料 用含抗凝剂的采血管进行采血，抗凝剂一般有EDTA和肝素，EDTA更好一些，不会影响下游的反应。 每5ml的血液中加入0.4ml 0.04M EDTA配好的EDTA溶液，颠倒混匀即可。 保存于-20℃至-80℃，最好在2个月内提取。 本文档共32页；当前第5页；编辑于星期三\21点8分 3%明胶，TES， Tris饱和酚（pH7.8），氯仿：异戊醇（24:1），无水乙醇，TE 离心机，7ml离心管，1.5mlEP管，中试管，移液器 本文档共32页；当前第6页；编辑于星期三\21点8分 ⑵方法： Ⅰ 提取WBC 取1ml 全血 等体积3%明胶 37℃静置，5·10min 取上清 3000r/min 离心 ，5min 弃上清 颠倒混匀 溶液颜色均