高效液相色谱仪的原理及应用知识课件.pptxVIP

高致液相色傳仪的原理 及应用2020/2/25 第一节高致液相色谱法原理 一，高致液相色锊法的定义和分矣 流动相是液体的色谱称为液相色错(LC)。在液相色错中，采用颗粒十分细的高致 固定相，并采用高压泵输送流动相，全 都工作通过伏森完成，这种色谱称为高 致液相色锊(HPLC)。2020/2/25页下 -、高效液相色谱法的定义和分类液相色错：单板色错和柱色谱。液相色错：分配色错、液固色嫌、寫子交换色锊、尺寸排阻色错。 气相色谱：挥发性物质，不能用于热不稳定 物质分析。液相色锊：可分祈各种物质，熬不稔定物质 ，但流动相有毒，运行梅作比GC难。能用 GC就用GC。2020/2/25页下 二、液相色锊中常用木语和参数只针对HPLC特有的，其会木语与第三幸同O粒间体积（Vo）:色错柱媾克剂颗粒间隙中流动相所占有的体积。孔体积 ⑺ ：色谱柱中多孔填充荆的所有孔洞中流动相所占有的体积。2020/2/25页下 二、液相色锊中常用木语和参数柱外体积热从遂样系统到检测裹之 间色错柱以外的液路都分中流动相所占有的 体液体总体积（Vo） :粒间体积、孔体积和 柱外体积之和。淋洗体积（V） :从进科开始针算的通过色锊柱的实餘淋洗体积。2020/2/25页下 三、反相高效液相色谱由推极性固定相和報性流动相所银成的液相 色谱体系。其代表性的固定相是十八烷基破合 硅肤（ODS柱厂代表性的流动相是甲孫和乙腈。是当今液相色锊的最主要分离模式。溶质在填科表面的烃矣和流动相之间遂行分配。 溶质在吸附于填科表面烃矣上的“故良固定相 和流动相之间連行分配溶质被吸附于填科表面炫矣分子上，矣似吸附 色谱。2020/2/25页下 四、正相高致液相色谱是由极性固定相和推极性（我孫极性）流动相所银成的HPLC体系。其代表性的固定相是改性破賤、氟基柱專，代表性的流幼相是正己恍。吸附色锊也爲正相HPLC。 溶剂洗脱强度近似地致溶剂的介电常数增加 而螬大，洗脱能力越孫，溶质在柱上係留时 间越长。2020/2/25页下 第工章龙致液相色锈汉的狙成Agilent 1100ri■ 、F譬，\42020/2/25饮?兮*i 高效液相色谱仪系统进样口高压泵色谱柱检测器废液2020/2/251■输液系 统2. 进样系 统3. 分离系 统4. 检测系 统5. 数据处 理系统流动相溶剂 1、输液系统贮液装置 脱气装置 高压输液泵 梯度淋洗系统输液系统的功能：1. 提供足够的驱动力使流动相通过填充柱2. 使流动相流量精确和稳定3. 使流动相组成精确2020/2/25 (1)贮液装置分析用高效液相色谱的流动相贮罐，常 用1L的锥形瓶加一个电磁搅拌器，在连接 到泵入口处的管线上要加一个过滤器。 (2)脱气装置用于脱去流动相中的溶解气体，流动相先经过脱 气装置再输送到色谱柱。 脱气机、超声脱气、真空脱气等。 (3)高压输液泵主要部件之一，压力：150?350X105 Pa。液v为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(10 R m)，体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高 速是高效液相色谱的特点之一。R L/min?几千mL/m in SCM/S/OCMOCM?ts賧抿族侧想窆^^ni- 11 ■ J ? 等度洗脱□2020/2/25 等度洗脱 离度差MeOH/H2O=8/22020/2/25_^0=6/4 分析时间长怎样解决呢? 95%梯度洗脱优点：可提高分离度、缩短分离时间、降低最小检测量和提高分离精度。2020/2/2530% 2、进样系统流路中为高压力工作状态， 通常使用耐高压的六通阀进样装置:样OP 入口样S出^流动相入口色道柱入口入口流动相入口样a坏灶。 1T叩出口入口a准备状态b 进样状态2020/2/25 3、分离系统高效分离柱直型不锈钢管，内径1?8mm，柱长5~40 cm。2020/2/25MWW 色谱柱填料C18色谱柱十八烷基硅基化学键合 到多孔硅胶或陶瓷微粒SIL多孔硅胶微粒ZORBAX Eclipse XDB-C8辛基硅烷化学键合到 多孔硅胶微粒上2020/2/25 柱的保养:1. 柱子在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动；2. 当柱子和色谱仪联结时，阀件或管路一定要清洗干净;3. 要注意流动相的脱气；4. 避免使用高粘度的溶剂作为流动相；5. 进样样品要预先提纯；6. 严格控制进样量；7. 每天分析工作结束后，要清洗进样阀中残留的样品；8. 每天分析测定结束后，都要用适当的溶剂来清洗柱；9. 若分析柱长期不使用，应用适当有机溶剂保存并封闭;2020/2/25 ODS柱的使用注意点：1） 柱压低于150 kg/cm2（15cm 色谱柱）2） 柱温在40°C左右，最高使用温度为50°C3） 流动相pH使用范围为2?7. 52020/2/25 a.紫外检测器应用最广，对大部