细胞实验报告_3.docVIP

PAGE PAGE 2 《细胞工程》综合实验 ——水稻愈伤组织的诱导和分化 摘 要 本实验以水稻成熟种子为实验材料，通过NB诱导、分化培养基培养，诱导出愈伤组织并使其分化形成新的水稻幼苗。在植物组织培养过程中，外植体生长所必需的营养成分和生长因子，主要由培养基提供 不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基，对组织培养取得成功是至关重要的。以植物器官、组织、细胞等作外植体进行离体培养都能形成愈伤组织。愈伤再经分化培养，通过器官发生途径或体细胞胚胎发生途径可再生成植株。外植体如果是带菌的，在接种前都必须消毒。对于难消毒的材料，有时要几种消毒剂配合使用；对于多茸毛表面粗糙不平的材料，要加展著剂（吐温20）以增强消毒效果。消毒效果的好坏，直接决定后期培养的成功率。如果染菌率太高，后期培养可能无法继续下去。本次实验就是通过组织培养的整个过程，来了解各个步骤的相关知识。 关键词：水稻 愈伤组织 诱导 再分化 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u 1 前言 4 2 材料与方法 4 2.1 仪器 4 2.2 设备 4 2.3 试剂 5 2.4 实验材料 5 3 实验方法 5 3.1 配母液 5 3.2 配NB诱导、分化培养基 6 3.3 高温高压灭菌 6 3.4 接种室、培养基及用具表面消毒 6 3.5 消毒剂的配制 7 3.6 种子去壳 7 3.7 外植体消毒 7 3.8 接种与观察（愈伤组织的诱导） 7 3.9 愈伤组织的再分化观察 8 4 实验结果 8 4.1愈伤组织的诱导与分化 8 4.2 实验结果分析 9 5 讨论分析 12 5.1愈伤组织的诱导问题分析 12 5.2愈伤组织再分化问题分析 12 5.3 操作分析 13 参 考 文 献 15 1 前言 在我国,愈伤组织的培养和应用已经越来越多以及成熟，如：优良植株的无性繁殖、无病毒植株的获得、优良植株的选育等等。同时，随着消费者对产品安全性要求的日益提高，植物细胞培养的应用已愈来愈广泛，如：药用代谢产物的制造、作为天然食品或者食品添加剂、杀虫剂和杀菌剂、饲料等，不仅更安全，而且能很好地解决现今产品出现的各种问题。因此，愈伤组织的培养变得更加重要，而本实验则针对由水稻胚培养出愈伤组织的诱导形成幼苗的成功率进行了研究。 愈伤组织是指一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化不断分裂、增生子细胞，这些细胞胞分裂快，结构疏松，颜色浅而透明，逐渐形成了无序结构的一团细胞。 水稻成熟胚愈伤组织的诱导和再生是组织培养中的两个关键问题，它们涉及到外植体的脱分化过程和愈伤组织的再分化过程。影响水稻胚性愈伤组织形成和植株再生能力的因素包括基因型、外源激素、渗透压、外植体来源、固化剂、培养基其它成份以及温度、光周期和继代时间等多个方面，其中材料和外源激素的种类、浓度和配比是最主要的因素。 植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。 2 材料与方法 2.1 仪器 万分之一电子天平、百分之一电子天平、超净工作台、高压锅、酸度计、磁力搅拌器及搅拌子、不锈钢过滤器、玻璃蒸馏水器、家用冰箱、超净工作台、培养室 2.2 设备 烧杯：100ml×1， 500ml×1 ；量筒：100ml×3， 250ml×1 ；磨口试剂瓶：100ml×1， 500ml×1；带盖试剂瓶：500ml×2；三角瓶： 100 ml×1，250 ml×1，50ml×2(无菌)，1000ml×1；培养皿：￠9cm×1；药匙；称量纸；牛皮纸；棉花塞；橡筋：若干、枪形镊：×4；无菌滤纸：（10cm×10cm）×5； 2.3 试剂 1N HCL；02N KOH；蔗糖（分析纯）；琼脂粉；N6大量：KNO3、CaCl2·2H2O 、MgSO4·7H2O、KH2P O4 、(NH4)2SO4；B5微量：KI 、H3BO3、MnO4·H2O、ZnSO4·7H2O、 Na2MoO4·2H2O、CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2EDTA、FeSO4·7H2O；B5有机：盐酸硫胺素、盐酸吡哆醇、烟酸、肌醇、谷氨酰胺、水解酪蛋白、脯氨酸、2、4－D、6-BA、NAA；75%酒精，2% NaCLO，无菌水(400ml) 2.4 实验材料 水稻种子 实验方法 3.1 配母液 B5微量元素母液（1000×/100ml） 按配方的1000倍用万分之一天平依次称量，搅拌溶解(溶解一种后再加另一种)后定容。用量极少的成分(如CuSO4·5H2O、CoCL2·6H2O、Na2MoO4·2H2O)即使按1000倍称量仍