基因工程的基本操作程序.pptVIP

[解析] (1)PCR扩增过程中,目的基因在高温下解旋为单链,降温时引物与单链互补序列结合,在酶的作用下进行子链延伸。(2)基因表达载体的构建是实施基因工程的核心。(3)将目的基因转入植物细胞常用农杆菌转化法。通过转化,目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达。 (4)检测对根结线虫敏感的番茄中是否插入目的基因,可采用DNA分子杂交技术。检测目的基因在分子水平是否表达则可以用抗原—抗体杂交的方法。(5)比较两种抗性基因(SIMi和CaMi)在转基因植株中的抗根结线虫的效果,可分别取等量的两种成功表达的转基因番茄植株接种等量根结线虫,比较其抗虫效果。 露一手 辛苦了，感谢大家的配合！ * 1.2 基因工程的基本操作程序 （第二课时） 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 核心 复习： 1、从基因文库中获取 种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因， 如：cDNA文库 未知序列 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 已知序列 一、目的基因的获取 复习： 已知目的基因的核苷酸序列、且基因比较大 已知目的基因的核苷酸序列、且基因比较小 2、利用PCR技术扩增 已知序列 一、目的基因的获取 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制_____________的核酸合成技术。 ②原理：__________ ③前提条件：_________________________________； 原料：___________、___________ 、 __________________、 ________________________。 ④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） ⑤结果： 体外 特定DNA片段 DNA双链复制 已知目的基因的核苷酸序列 四种游离的脱氧核苷酸 一对引物 热稳定DNA聚合酶 指数 2n 模板DNA 多聚酶链式反应 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增 复习： （Taq酶） 1 2 基因表达载体的组成： 复制原点+启动子+目的基因+终止子+标记基因 二、基因表达载体的构建 —基因工程的核心 它们的作用是什么？ b、目的基因 a、启动子 c、终止子 d、标记基因 一段有特殊结构的DNA片段，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 位于基因的末端,它能阻碍RNA聚合酶移动，终止目的基因的转录 鉴别受体细胞是否含有目的基因， 筛选出含有目的基因的受体细胞 复习： 三、将目的基因导入受体细胞 1 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程， 2 常用的受体细胞： 大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 3 目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 三、将目的基因导入受体细胞 称为转化 关键？ 将目的基因插入受体细胞染色体DNA上 新授一 （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染双子叶植物和裸子植物，对大多数 单子叶植物没有感染能力。 ②原理：Ti质粒上的T---DNA可以转移到受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。 1、目的基因导入植物细胞的方法 经济有效，最常用的方法 ③受体细胞:植物体细胞。 三、目的基因导入受体细胞 构建基因表达载体 转入 农杆菌 植物细胞 导入 稳定维持和表达 ③过程： 利用农杆菌侵染植物的原理 （2）基因枪法（又称微弹轰击法）：目的基因导入单子叶植物细胞 ①操作方法：利用压缩气体产生的动力 ，将包裹在金属粒表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合并表达的方法。 ② 钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um 。 ③适用：单子叶植物 1、目的基因导入植物细胞的方法 缺点：成本高 （3）花粉管通道法：将目的基因导入植物细胞 ①操作方法：在植物花受粉后，花粉形成花粉管还末愈合前期，剪去柱头，然后，滴入DNA（含的基因）使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞 ② 特点:十分简便经济。 ③例：我国的转基因抗虫棉 1、目的基因导入植物细胞的方法 ①方法：显微注射法 ②程序： 目的基因表达载体提纯 取受精卵 显微注射 移植到子宫 受精卵发育 新性状动物 2、目的基因导入动物细胞的方法 ③受体细胞: 受精卵 选用受精卵作为受体细胞的原因？ 受精卵具有体积大，易操作，经培养可直接表达性状的优点 3、将目的基因导入微生物细胞 ①微生