饲料原料 酵母水解物和酿酒酵母细胞壁中甘露聚糖的测定.pdfVIP

饲料原料 酵母水解物和酿酒酵母细胞壁中 甘露聚糖的测定 1 范围 本文件描述了饲料原料酵母 （Saccharomyces cerevisiae）水解物和酿酒酵母细胞壁中甘露聚糖含 量测定的离子色谱和高效液相色谱法。 本文件适用于饲料原料酵母水解物和酿酒酵母细胞壁中甘露聚糖的测定。 本文件中离子色谱法的检出限为 0.02%，定量限为 0.06% ，高效液相色谱法的检出限为 0.05%，定 量限为 0.15% 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 离子色谱法 4.1 原理 试样中的甘露聚糖经盐酸水解得到甘露糖，经离子色谱柱分离和脉冲安培检测器检测，外标法得到 甘露糖浓度，将其乘以单糖与聚糖含量间的换算系数，获得样品中甘露聚糖的含量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定，本方法所使用试剂均为分析纯。 4.2.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2.2 盐酸：优级纯。 4.2.3 氢氧化钠：优级纯。 4.2.4 氢氧化钠溶液 （4 mol/L）：准确称取 160 g 氢氧化钠 （4.2.3）于烧杯中，加适量水溶解后， 用水转移至 1 L 容量瓶中，并定容，混匀后储于塑料瓶，室温保存，有效期为两周。 4.2.5 氢氧化钠溶液 （0.2 mol/L）：准确称取 8 g 氢氧化钠 （4.2.3）于烧杯中，加水溶解后，用水 移入 1 L 容量瓶中并定容，混匀后转移至塑料瓶，室温保存，有效期为两周。 4.2.6 甘露糖标准储备溶液 （1 mg/mL）：称取甘露糖标准品（CAS：3458-28-4，纯度不低于99 %） 0.1 g (精确 0.0001 g)于 100 mL 容量瓶中，用水溶解定容。该溶液于 0℃~4℃冷藏保存，有效期为两 周。 4.2.7 甘露糖标准中间溶液（50 μg/mL）：准确吸取甘露糖标准储备溶液（4.2.6）0.5 mL,置于 10 mL 容量瓶中，加水至刻度，摇匀。临用现配。 4.2.8 甘露糖标准系列溶液：准确移取适量甘露糖标准中间溶液 （4.2.7），用水稀释配成浓度分别 为:0.5 μg/mL、1 μg/mL、2 μg/mL、4 μg/mL、8 μg/mL、12 μg/mL标准系列溶液。临用现配。 3 4.2.9 微孔滤膜：0.45 μm，水系。 4.3 仪器设备 4.3.1 离子色谱仪：配有脉冲安培检测器。 4.3.2 分析天平：感量为 0.0001 g。 4.3.3 水浴锅。 4.3.4 压力蒸汽灭菌器。 4.3.5 旋涡混合器。 4.3.6 pH 计，精度±0.01。 4.3.7 水解瓶：耐高温带盖玻璃瓶，250 mL。 4.4 样品 按 GB/T 20195 制备试样，粉碎过 0.42 mm 孔径的筛，充分混匀，装入磨口瓶中，避光保存，备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 试样水解 平行做两份试验。称取试样0.4 g，准确至0.0001 g，置于 20 mL的带螺帽玻璃试管中，准确加入 6 mL盐酸 (4.2.2)，加盖后涡旋1 min。将试管放入30℃水浴中，温浴45 min，其间每15 min涡旋混合一 次，每次1 min。然后将内容物全部转移到250 mL水解瓶中，用100 mL的水，分几次冲洗试管，洗涤液 并入水解瓶中。将水解瓶封口后放入高压灭菌锅，121℃下热压60 min。取出后冷却，用氢氧化钠溶液 (4.2.4)将水解液调pH到6.5±0.2。将水解液用水全部转移到200 mL （V）容量瓶并定容，摇匀后，精确 移取2 mL （V ）定容后水解液，用水稀释定容至100mL （V ），摇匀，取约4 mL过0.45 μm滤膜备离子色 1 2 谱检测用。此溶液需在12 h内完成分析检测。 4.5.2 离子色谱参考条件