生物化学实验：实验七 牛乳中酪蛋白的制备.docVIP

实验七 牛乳中酪蛋白的制备 目的要求： 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。 实验原理: 牛乳中主要含有酪蛋白和乳清蛋白两种蛋白质。其中酪蛋白占了牛乳蛋白质的80%。酪蛋白是白色、无味的物质。不溶于水、乙醇及有机溶剂，但溶于碱溶液。牛乳在pH4.7时酪蛋白等电聚沉后剩余的蛋白质统称乳清蛋白。乳清蛋白不同于酪蛋白，其粒子的水合能力强、分散性高，在乳中呈高分子状态。 本法利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。酪蛋白含量约为35g/L。 试剂和器材 一、试剂 95%乙醇；无水乙醚；乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1)；冰乙酸 。 0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL： A液：称取NaAc?3H2O 54.44g，定容至2000mL。 B液：称取优级纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000mL。 取A液1770mL，B液1230mL混合即得pH4.7的醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL。 二、材料 牛奶制品。 三、器材 低速离心机，精密pH试纸或酸度计，水浴锅，烧杯，温度计，天平。 操作方法 1．将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40 将上述悬浮液冷却至室温。离心15min(3000r/min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品